HTLV-1 TaxによるゲノムDNAメチル化制御異常の誘導機構

HTLV-1 Tax诱导异常基因组DNA甲基化调控的机制

基本信息

批准号：
11877038
负责人：
渡邉俊樹
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877038/
关键词：
HTLV-1 Tax、Dnmt1 CpGメチル化

项目摘要

癌細胞でDNAメチル化異常が認められることは周知であるが、その誘導に関わる分子機構は不明である。細胞分裂=DNA複製後のゲノムのメチル化パターンの継承は"maintenance methylase=Dnmt1"に依存する。Dnmt1はDNA-Dnmt1-PCNA複合体形成を介して機能するが、本研究では、ヒト白血病ウイルスHTLV-1のoncoproteinであるTaxがp21WAF1の発現誘導を介してこのDNA-Dnmt1-PCNA複合体形成を競合的に阻害し、DNAメチル化パターンの継承を撹乱し、ゲノムのhypomethylation化を促進すると言う仮説に基づき、Taxがメチル化されたプロモーターを脱メチル化する事を解析する系の確立を目指した。HTLV-1感染T細胞株の解析では、ウイルス遺伝子を発現しTaxの存在する細胞ではIFN-γ等のサイトカイン遺伝子のプロモーター領域のCpGが脱メチル化しているのに対し、MT-1等のウイルス遺伝子の発現していない細胞株やJurkatではメチル化レベルが低下している事が明らかになった。さらにCdで誘導可能なTaxをもつJurkat細胞JPX9を用いて、Taxの発現とメチル化の相関の解析を試みた。しかし、JPX9はTaxの発現に伴いp21WAF1の発現が誘導されるが、2日目以降著明なアポトーシスを示す事から、DNA複製サイクルを経た後のCpGメチル化解析には適さないことが明らかになった。そこで、Taxによるアポトーシス誘導に対して体制を示すJPX9細胞の作製を試みる事にし、レトロウイルスベクターを用いてアポトーシス抑制因子であるCrmAを導入したJPX9-Crmを作製し解析を進めている。

众所周知，在癌细胞中观察到异常的DNA甲基化，但涉及诱导的分子机制尚不清楚。细胞分裂后基因组甲基化模式的遗传= DNA复制取决于“维持甲基酶= DNMT1”。 Dnmt1 functions through DNA-Dnmt1-PCNA complex formation, but in this study, we aimed to establish a system that analyzes Tax, the oncoprotein of human leukemia virus HTLV-1, competitively inhibits the formation of this DNA-Dnmt1-PCNA complex via induction of expression of p21WAF1, disrupts the inheritance of DNA methylation patterns, and promotes基因组的低甲基化。对HTLV-1感染的T细胞系的分析表明，在表达病毒基因的细胞中，存在税收的细胞，在细胞因子基因的启动子区域（例如IFN-γ）中的CpG被脱甲基化，而在不表达病毒基因（例如MT-1和Jurkat）的细胞系中，甲基化水平降低了。此外，我们尝试使用具有CD诱导税的JPX9分析税表达与甲基化之间的相关性。但是，尽管JPX9诱导P21WAF1的表达并以税收表达诱导，但由于它表现出明显的细胞凋亡，因此已证明它不适用于DNA复制周期后的CpG甲基化分析。因此，我们决定尝试创建JPX9细胞，该细胞证明了通过税收诱导凋亡的制度，并正在使用逆转录病毒载体生成JPX9-CRM，该jpx9-CRM已与CRMA（一种凋亡抑制剂）一起引入，现在正在分析它。