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ATL腫瘍細胞におけるLECAM-1発現異常の分子機構の解析

ATL肿瘤细胞LECAM-1异常表达的分子机制分析

基本信息

批准号：
05670901
负责人：
渡邉俊樹
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670901/
关键词：
ATL LECAM-1 過剰発現プロモーター CATアッセイ HTLV-1 Tax

项目摘要

本年度の研究計画に基づき以下の事柄を明らかにした。ATL腫瘍細胞に於けるLECAM-1mRNAの発現の解析を、7例の患者の新鮮白血病細胞についてNorthernブロット法で行った。その結果、構成的な過剰発現が認められ、これがATL腫瘍細胞に共通する一般的な現象であることが確認された。リンパ球活性化刺激に対する発現の変化を解析したところ、正常リンパ球とは逆に発現が更に増強する例が認められ、このときHTLV-1pXmRNAの発現も誘導されていた。発現の変化の認められなかった2例は共に欠損型ウイルスを持つことが明らかになった。LECAM-1のプロモーターを同定するため我々は、"Oligo Cap法"を用いて、mRNAの5'末端を明らかにした。その結果、Tedderらの報告しているエクソン2の上流14bpから転写されているものが40%を占め、その他はその前後10〜20bp〜転写されていることが明らかになった。主な転写開始点を含む上流約1000bpをPCRでクローニングしCATプラスミドに導入してプロモーター活性を検討した結果、確かにプロモーターとして機能することが示された。転写開始点の上流には典型的TATAボックス等は存在しなかった。細胞株(Jurkat、FL)を用いたcotransfection assayでHTLV-1Taxによる転写活性化の有無を検討したところ、約5-6倍の転写活性化が認められた。現在この転写活性化に関わるプロモーター領域の解析を行っている。これらの結果は、第52回日本癌学会総会、第16回日本分子生物学会年会で発表し現在投稿準備中である。

This year's research plan is based on the following issues: Analysis of LECAM-1mRNA Expression in ATL Tumor Cells and Northern blot Analysis of Fresh Leukemic Cells from 7 Patients The results and composition of the tumor cells were identified as common phenomena. The expression of HTLV-1 pX mRNA was induced by the activation of the protein. 2 cases of incomplete damage LECAM-1 mRNA is expressed at the 5'end of the mRNA. The results of Tedder's report are as follows: 40% of the upper 14bp of Tedder's report is as follows: 10 ~ 20bp of Tedder's report is as follows: About 1000bp upstream from the main writing start point, PCR is used to detect CAT activity and to detect CAT activity. The writing start point and the upper stream are typical of TATA, etc. Cell lines (Jurkat, FL) were tested for HTLV-1Tax by cotransfection assay, and 5-6 fold higher cotransfection activity was detected. Now we are going to write the activation code for the analysis of the domain. The 52nd Annual Meeting of the Japanese Cancer Society and the 16th Annual Meeting of the Japanese Molecular Biology Society are now in preparation for submission.