ATL腫瘍細胞におけるLECAM-1発現異常の分子機構の解析

ATL肿瘤细胞LECAM-1异常表达的分子机制分析

基本信息

批准号：
05670901
负责人：
渡邉俊樹
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670901/
关键词：
ATL LECAM-1 過剰発現プロモーター CATアッセイ HTLV-1 Tax

项目摘要

本年度の研究計画に基づき以下の事柄を明らかにした。ATL腫瘍細胞に於けるLECAM-1mRNAの発現の解析を、7例の患者の新鮮白血病細胞についてNorthernブロット法で行った。その結果、構成的な過剰発現が認められ、これがATL腫瘍細胞に共通する一般的な現象であることが確認された。リンパ球活性化刺激に対する発現の変化を解析したところ、正常リンパ球とは逆に発現が更に増強する例が認められ、このときHTLV-1pXmRNAの発現も誘導されていた。発現の変化の認められなかった2例は共に欠損型ウイルスを持つことが明らかになった。LECAM-1のプロモーターを同定するため我々は、"Oligo Cap法"を用いて、mRNAの5'末端を明らかにした。その結果、Tedderらの報告しているエクソン2の上流14bpから転写されているものが40%を占め、その他はその前後10〜20bp〜転写されていることが明らかになった。主な転写開始点を含む上流約1000bpをPCRでクローニングしCATプラスミドに導入してプロモーター活性を検討した結果、確かにプロモーターとして機能することが示された。転写開始点の上流には典型的TATAボックス等は存在しなかった。細胞株(Jurkat、FL)を用いたcotransfection assayでHTLV-1Taxによる転写活性化の有無を検討したところ、約5-6倍の転写活性化が認められた。現在この転写活性化に関わるプロモーター領域の解析を行っている。これらの結果は、第52回日本癌学会総会、第16回日本分子生物学会年会で発表し現在投稿準備中である。

根据今年的研究计划，澄清了以下项目。通过对七名患者的新鲜白血病细胞对ATL肿瘤细胞中LECAM-1 mRNA表达的分析。结果，观察到本构的过表达，并证实这是ATL肿瘤细胞共有的常见现象。当分析淋巴细胞激活刺激的表达变化时，在某些情况下，表达进一步增强，与正常的淋巴细胞相反，此时，还诱导了HTLV-1PX mRNA的表达。据表明，两种不存在表达变化的病例都伴随着缺乏病毒。为了识别LECAM-1的启动子，我们使用“寡磷帽法”来揭示mRNA的5'端。结果，据揭示了40％的病例是由Tedder等人报道的，从外显子2上游的14 bp转录，而其他病例则在此之前和之后将其他病例转录为10至20 bp。 PCR克隆了大约1000 bp的上游，包括主要转录起始点，并引入CAT质粒以检查启动子活性，并且表明它肯定是启动子。没有典型的tata盒等。转录起点的上游。当使用使用细胞系（Jurkat，FL）的共转染测定法检查HTLV-1TAX的转录激活或不存在转录激活时，观察到转录激活约5-6次。目前，我们正在分析涉及转录激活的启动子区域。这些结果是在日本癌症学会和日本分子生物学学会的第16届年会的第52届大会上提出的，目前正在准备提交。