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生体分解性高分子ナノスフェアーによる網膜組織への遺伝子導入に関する基礎的研究

利用生物可降解聚合物纳米球将基因转移到视网膜组织的基础研究

基本信息

批准号：
11877301
负责人：
小椋祐一郎
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877301/
关键词：
ナノスフェアー硝子体ドラッグデリバリーフルオレセイン

项目摘要

ナノスフェアーの硝子体内投与により、組織学的に網膜内に到達することがin vivoで証明された。この結果をもとに、網膜の細胞内へ遺伝子を導入する目的でナノスフェアーを非ウイルスベクターとして用い検討した。今回、細胞内へ導入されると蛍光を発するGreen Fluorescent Protein(GFP)を発現するGFP cDNAを用いた。GFP cDNA含有生体内分解性乳酸・グリコール酸共重合体(PLGA)ナノスフェアーを溶媒拡散を伴う液中乾燥法により調製した。そのGFP cDNA含有PLGAナノスフェアーを有色家兎に硝子体内投与し、網膜に取り込まれたGFP cDNAにより発現したGFP蛍光量を経時的にSLOを用いて評価した。また、眼球摘出後、連続切片作製し蛍光顕微鏡により組織学的にGFP蛍光を見て、GFPの発現の有無を検討した。GFP cDNA含有PLGAナノスフェアーを硝子体内投与後、経時的にSLOにより眼底を観察したが、蛍光を発しなかった。また、硝子体内投与後1週間後の蛍光顕微鏡観察による蛍光も認められなかった。ナノスフェアーを用いたGFP cDNAの細胞内導入がされなかった原因として、GFP cDNA含有PLGAナノスフェアーを調製する過程において、DNAの不活化もしくはDNA量の減少、また硝子体内投与による網膜移行性の問題が考えられた。今後の検討として、調製後のin vitroにおけるナノスフェアー内のGFP cDNA量、不活化しない調製方法の検討、投与法として網膜下投与を予定している。

In vivo, the presence of nitrates in the retina was demonstrated histologically. The result is that the intracellular protein of retina is introduced into the brain. Now, GFP cDNA is used in the expression of Green Fluorescent Protein(GFP) after intracellular transfection. GFP cDNA contains an in vivo degradable lactic acid complex (PLGA). The GFP cDNA contains PLGA, which can be used in vivo to evaluate the expression of GFP in the retina. After enucleation, the tissue sections were prepared, and the GFP fluorescence and GFP expression were examined histologically by microscopy. GFP cDNA contains PLGA and SLO when administered in vivo. A week after the injection of nitrates into the body, the light was detected by microscopical examination. The reason why GFP cDNA is introduced into cells is that GFP cDNA contains PLGA. The reason why GFP cDNA is introduced into cells is that GFP cDNA contains PLGA. The reason why GFP cDNA is introduced into cells is that GFP cDNA contains PLGA. In the future, the amount of GFP cDNA in vitro after modulation, the method of modulation without activation, the method of injection, and the method of injection into retina will be discussed.