生体分解性高分子ナノスフェアーによる網膜組織への遺伝子導入に関する基礎的研究

利用生物可降解聚合物纳米球将基因转移到视网膜组织的基础研究

• 批准号: 11877301
• 负责人: 小椋 祐一郎
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877301/
• 关键词: ナノスフェアー; 硝子体; ドラッグデリバリー; フルオレセイン

ナノスフェアーの硝子体内投与により、組織学的に網膜内に到達することがin vivoで証明された。この結果をもとに、網膜の細胞内へ遺伝子を導入する目的でナノスフェアーを非ウイルスベクターとして用い検討した。今回、細胞内へ導入されると蛍光を発するGreen Fluorescent Protein(GFP)を発現するGFP cDNAを用いた。GFP cDNA含有生体内分解性乳酸・グリコール酸共重合体(PLGA)ナノスフェアーを溶媒拡散を伴う液中乾燥法により調製した。そのGFP cDNA含有PLGAナノスフェアーを有色家兎に硝子体内投与し、網膜に取り込まれたGFP cDNAにより発現したGFP蛍光量を経時的にSLOを用いて評価した。また、眼球摘出後、連続切片作製し蛍光顕微鏡により組織学的にGFP蛍光を見て、GFPの発現の有無を検討した。GFP cDNA含有PLGAナノスフェアーを硝子体内投与後、経時的にSLOにより眼底を観察したが、蛍光を発しなかった。また、硝子体内投与後1週間後の蛍光顕微鏡観察による蛍光も認められなかった。ナノスフェアーを用いたGFP cDNAの細胞内導入がされなかった原因として、GFP cDNA含有PLGAナノスフェアーを調製する過程において、DNAの不活化もしくはDNA量の減少、また硝子体内投与による網膜移行性の問題が考えられた。今後の検討として、調製後のin vitroにおけるナノスフェアー内のGFP cDNA量、不活化しない調製方法の検討、投与法として網膜下投与を予定している。

Youdaoplaceholder0 ナノスフェア ナノスフェア the in vivo administration of <s:1> nitro to によ and the に omentum of histology に to する とが とがin vivoで proved された. こ の results を も と に, retinal へ の cell but 伝 を import す る purpose で ナ ノ ス フ ェ ア ー を non ウ イ ル ス ベ ク タ ー と し て in い beg し 検 た. This time, されると蛍 light was introduced into the cells を to produce するGreen Fluorescent Protein(GFP)を to produce するGFP cDNAを using へ た. GFP cDNA containing raw of decomposition of lactic acid in the body, グ リ コ ー ル acid (PLGA), weigh fit ナ ノ ス フ ェ ア ー を solvent scattered を company with う fluid drying に よ り modulation し た. そ の GFP cDNA contains PLGA ナ ノ ス フ ェ ア ー を non-ferrous home 兎 に glass body shots and し, retinal に り 込 ま れ た GFP cDNA に よ り 発 now し た GFP 蛍 light を 経 when に SLO を with い て review 価 し た. ま た, after eyeball enucleation, even 続 slicing system し 蛍 light 顕 micromirror に よ り histological に GFP 蛍 light を て, GFP の 発 の presence of を now beg し 検 た. GFP cDNA contains PLGA ナ ノ ス フ ェ ア ー を glass body after, when 経 に cast and SLO に よ り fundus を 観 examine し た が 蛍 light を 発 し な か っ た. Youdaoplaceholder0, one week after the internal exposure of the nitron, the 蛍 light 顕 microscope 観 examination による蛍 light による蛍 recognition められな 観 った. ナ ノ ス フ ェ ア ー を with い た GFP cDNA の intracellular import が さ れ な か っ た reason と し て, GFP cDNA contains PLGA ナ ノ ス フ ェ ア ー を modulation す る process に お い て, DNA の inactive も し く は の DNA quantity reduce, ま た glass body shots and に よ る retinal transitional sex の が exam え ら れ た. Beg と future の 検 し て, modulated の in vitro に お け る ナ ノ ス フ ェ ア ー within の GFP cDNA amount, no activation し な い modulation method の 検 beg, cast and と し て retinal pitch and を designated し て い る.

项目成果

Eiji Sakurai,Hironori Ozeki,Noriyuki Kunou,Yuichiro Ogura: "Effect of particle size of polymeric nanospheres on intravitreal kinetics."Ophthalmic Research. 33. 31-36 (2001)

Eiji Sakurai、Hironori Ozeki、Noriyuki Kunou、Yuichiro Ogura：“聚合物纳米球粒径对玻璃体内动力学的影响。”眼科研究。