t(1;3)転座を有する造血器腫瘍における原因遺伝子の同定

通过 t(1;3) 易位鉴定造血肿瘤的致病基因

• 批准号: 00J60808
• 负责人: 細谷 紀子
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J60808/
• 关键词: t(1;3)転座; 染色体転座; FISH

t(1;3)(p36;q26)転座を有する白血病の原因遺伝子を単離することを最終目標に研究を準めてきた。前年度までに、t(1;3)(p36;q26)転座を有する白血病の症例から樹立したH3細胞株を材料にして、サザンブロット法により3番染色体上の転座切断点を含む領域を絞り込み、さらに、その領域の塩基配列をもとにprimerを数種設計してinverse PCR法を施行することによりt(1;3)転座を含むクローンを得ることに成功し、3番染色体側、並びに、1番染色体側のゲノム上の転座切断点をそれぞれ3q25.3,1p36.3上に同定した。それらの切断点は、過去に報告されている3q21q26症候群、あるいは、t(1;3)(p36;q21)転座での転座切断点のクラスター領域とは離れた位置に存在していた上、それぞれで発現が異常亢進しているとされているEVII遺伝子、MEL1遺伝子共々、本細胞株では発現を認めないことを確認した。従って、本細胞株の由来する症例では、異なった発症機序が存在することが考えられた。今年度は、同定した転座切断点の近傍に存在する責任遺伝子の候補の探索を行った。切断点を同定した時点では、3番側、1番側の両転座切断点領域とも、ゲノム塩基配列が決定されていなかったため、今年度は、ゲノムプロジェクトの進行状況を検索しつつ、転座領域のPAC/BACクローンのゲノムライブラリーを作成し、ランダムシークエンス法による両染色体転座領域のゲノム塩基配列決定作業を行った。結果、転座点付近のゲノム塩基配列が決定できた。3番染色体切断点付近130Kb以内に、既知の遺伝子と未知のESTクローンが存在しており、かつ、1番染色体切断点近傍に位置すると思われるクローンも同定した。現在、H3細胞株におけるこれらの構造遺伝子の発現の異常の有無を検討中である。

进行了研究的最终目的是将引起白血病的基因与t（1; 3）（p36; q26）易位分离。 By the previous year, we used H3 cell lines established from cases of leukemia with t(1;3)(p36;q26) translocation as material, and narrowed down the region containing the translocation breakpoint on chromosome 3 using Southern blotting, and then we designed several primers based on the nucleotide sequence of that region and performed an inverse PCR method to obtain clones containing the t(1;3) translocation, and identified the translocation在3Q25.3和1P36.3上的基因组上的基因组和染色体1侧的断点。据证实，这些断点远离先前报道的3Q21Q26综合征，或t（1; 3）（p36; q21）易位的易位断点的簇区域，并且在该细胞系中未观察到EVII和MEL1基因，据说在表达中均异常升高。因此，认为在得出该细胞系的情况下存在不同的发作机制。今年，我们搜索了在确定的易位断点附近存在的候选负责基因。在鉴定断点时，尚未确定第三和第一易位断点区域的基因组核苷酸序列，因此，今年，我们在搜索基因组序列的进度时，在寻找基因组核苷酸序列的进度时，我们创建了一个易位区域的PAC/BAC克隆基因组库，并使用两种基因组核苷序列进行了chromosome seque for Chromosome triplastions。结果，确定了易位点附近的基因组核苷酸序列。还发现了一个已知的基因和一个未知的Est克隆在130 kb的3染色体内，并且还确定了一个被认为位于染色体1断点附近的克隆。目前，我们正在研究这些结构基因的表达在H3细胞系中是否异常。