触媒抗体の触媒機能発現メカニズムの解明と活性向上を目指した改変

阐明催化抗体催化功能表达的机制以及旨在提高活性的修饰

• 批准号: 12019209
• 负责人: 嶋田 一夫
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12019209/
• 关键词: NMR; 立体構造; 触媒抗体; 遷移状態

本研究ではクロラムフェニコール・リン酸エステル誘導体を抗原として得られたエステル加水分解を触媒する数種類の抗体(生物分子工研・藤井博士により供与された)を解析の対象とした.その中で触媒抗体6D9および7C8を研究対象として取り上げ、その触媒活性発現機構を構造生物学的見地より明らかにする目的で以下の研究を進めた.1)TRNOE法により,触媒抗体に結合した基質,および遷移状態アナログの構造決定を行う.2)安定同位体利用NMR法により,遷移状態アナログおよび基質結合状態における,触媒抗体反応部位のアミノ酸残基の存在様式を解明する.TRNOE解析の結果から,触媒抗体6D9のエステル結合は不安定なシス型に偏ったコンフォメーションをとり、基底状態の基質を不安定化させている可能性が示唆された.7C8の触媒部位にはHis残基が存在し、その化学状態(プロトネーション状態)が活性発現に重要であることが明らかになった。

In this study, several kinds of antibodies (biomolecule Dr. Ito Fujii) were analyzed. A study on the 6D9 antibody to the catalyst in the laboratory. The study on the activity of the catalyst has been carried out in the field of biology. 1) the TRNOE method is used to determine the activity of the catalyst. 2) Diazepam isotopes are used by NMR method. There is a formula for the presence of acid residues at the reaction site of the catalyst antibody. The results of TRNOE analysis show that there is a formula for the presence of acid residues in the reaction site of the catalyst antibody. The presence of 6D9 residues in the presence of His residues in the catalyst site, the presence of His residues in the catalyst site, and the activity of the chemical state in the presence of His residues in the catalyst site, the presence of His residues in the catalyst site and the activity of the chemical state.

项目成果

Kazuyasu Shindo: "Backbone ^1H,^<13>C, and ^<16>N resonance assignments of the anti-dansyl antibody Fv fragment"J.Biomol.NMR. 17. 357-358 (2000)

Kazuyasu Shindo：“抗丹磺酰抗体Fv片段的主链^1H、^13C和^16N共振归属”J.Biomol.NMR。

Katsuyoshi Masuda: "Pairing of oligosaccharides in the Fc region of immunoglobulin G"FEBS Lett.. 473. 349-357 (2000)

Katsuyoshi Masuda：“免疫球蛋白 G Fc 区寡糖的配对”FEBS Lett.. 473. 349-357 (2000)

Hideo Takahashi: "A Novel NMR Method for the Determination of the Interface of Large Protein-protein Complexes"Nature Struct.Biol. 7. 220-223 (2000)

Hideo Takahashi：“一种测定大蛋白质-蛋白质复合物界面的新型核磁共振方法”Nature Struct.Biol。

Koichi Kato: "Structural Basis of the Interaction between IgG and Fc Receptors"J.Mol.Biol.. 295. 213-224 (2000)

加藤浩一：“IgG 和 Fc 受体之间相互作用的结构基础”J.Mol.Biol.. 295. 213-224 (2000)

Ichio Shimada: "NMR Analysis of Interactions Between Bio-Macromolecules"Real-Time Analysis of Biomolecular Internations(K.Nagata and H.Handa,ed.). 223-231 (2000)

Ichio Shimada：“生物大分子之间相互作用的核磁共振分析”生物分子国际实时分析（K.Nagata 和 H.Handa 编辑）。