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原子レベルでの病態解明に向けたハイスループットな分子間相互作用解析法の開発

开发高通量分子相互作用分析方法以阐明原子水平的病理状况

基本信息

批准号：
14013015
负责人：
嶋田一夫
金额：
$ 3.33万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14013015/
关键词：
交差飽和法タンパク質複合体転移交差飽和法相互作用 NMR

项目摘要

申請者の開発したNMRを用いた交差飽和法によるタンパク質複合体相互作用界面決定法は、複合体のNMRシグナルの観測を行うため、現実的な適用限界はタンパク質複合体の分子量が5万程度のものまでに限られていた。この場合、創薬のターゲットとなる可能性の高い膜タンパク質などの高分子量タンパク質複合体には適用が困難であった。そこで、その限界を打ち破るために、測定法の開発を行った。タンパク質複合体において、リガンドタンパク質を過剰量加えることにより、その分子について非結合状態と結合状態の交換系を作り出すことが可能となる。この交換が適当な頻度で起こっている場合、非結合状態の分子においても、結合状態で生じた交差飽和の影響を保持していると考えられる。よって、非結合状態由来のNMRシグナルを観測することにより、複合体そのもののNMRシグナルを観測せずに、複合体の相互作用界面に関する情報が得られると考えた(転移交差飽和法)。リガンド-タンパク質モル比、化学交換速度、溶媒の軽水/重水率、飽和方法・時間、等の探索を行なったところ、分子量164Kの複合体において界面の決定に成功した。

The applicant's development of NMR is based on the cross-saturation method, and the determination of the interaction interface of the complex is based on the NMR measurement of the complex. The application limit of NMR is about 50,000. In this case, it is difficult to apply the high molecular weight complex with high possibility of creating a compound. The development of the method of measurement is carried out in the following ways: The molecular structure of the complex is composed of a complex of molecules in an unbound state and an exchange system in a bound state. The frequency of exchange is appropriate, the molecular state is not bound, and the influence of saturation is maintained. The NMR spectra of the complex and the interaction interface of the complex were obtained by the shift cross saturation method. The determination of the mass ratio, chemical exchange rate, solvent water/heavy water ratio, saturation method, time, etc. of the complex with molecular weight of 164K was successful.