权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

ドミナント・ネガティブXlim-1を用いた内在性Xlim-1の機能解析

使用显性失活 Xlim-1 对内源性 Xlim-1 进行功能分析

基本信息

批准号：
10171207
负责人：
平良眞規
金额：
$ 1.47万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Xlim-1の転写活性化領域をengrailedの転写抑制領域と置き換えたドミナン卜・ネガティブ型コンストラクト(Xlim1-enR)をmRNA微量注入法によりオーガナイザー領域に発現させたところ、高率に頭部を欠損した胚が得られる。そこで分子マーカーを用いて脳の欠失部位を調べたところ、脳峡のマーカーen-2は消失し、後脳のマーカーのKro x20の発現は残ることより欠失領域は後脳より前方部分であることが判明した。この表現形はマウスのLim1ホモ変異体の表現形と良く一致していることより、内在性のXlim-1の機能阻害によるものと予想された。このことはXlim1-enRがXlim-1のin vivoでの転写因子としての機能を解析する上で有用な手段となり得ることを示している。そこでXlim1-enRによる阻害効果を背側中胚葉特異的分子マーカーで調べたところ、chordin、Otx2、cerberusの発現は強く抑制されることが示された。活性型Xlim-1はアニマルキャップにおいてchordinとOtx2の発現を引き起こすことは既に示されていたが、今回さらにcerberusの発現も引き起こすことが見い出され、これらの遺伝子はいずれもXlim-1の標的遺伝子の有力候補となった。昨年度に引き続きXlim1-enRの特異性を調べるために回復実験を試みた。Xlim1-enRと共注入するものとしては、活性型とxlim-1(LIMドメイン点変異体と欠失変異体)、野生型Xlim-1、野生型Xlim-1とLdb1、で行ったが、何れによっても回復は認められなかった。アニマルキャップアッセイにおいてアクチビン処理で引き起こされるchordinとcerberusの発現はXlim1-enRにより抑制されるが、野生型Xlim-1の共発現では回復するよりむしろ協調的に抑制が増強された。Xlim-1はLdb1と共に4量体を生成するとされているが、今回我々の得た結果はXlim-1がこの様な転写因子複合体として機能していることを示唆しており、今後のXlim-1の機能ドメインの詳細な解析の必要性を示している。

Xlim-1's active writing area has been engrailed and its writing inhibiting area has been replaced by a new type of activating area (Xlim-1) lim1-enR) The micro-injection method of mRNA is used to achieve high-efficiency head-to-head damage and embryo loss in the field.そこでmolecule マーカーを Use いての无码不卡べたところ, 脳 Gorge のマーカーen-2は disappear し, 后脳のマーカーのKro x20の発appears to be incomplete, and the missing area is missing. The front part of the missing area is clear.このexpression form はマウスのLim1 ホモ変variant のexpression form と好く Same していることより、Intrinsic のXlim-1のfunction is hindered by によるものと yu think された.このことはXlim1-enRがThe inhibitory effect of そこでXlim1-enRによるをdorsal mesodermal leaf-specific molecule マーカーで调べたところ, chordin, Otx2, cerberus の発 appear は strong く suppress されることが show された. Active type Xlim-1はアニマルキャップにおいてchordin Otx2's の発appears and leads to こすことはboth showing and されていたが、this return さらにcerberusの発appearsもinducingきriseこすことが见い出され、これらの缝子はいずれもYesterday's annual に cited き続きXlim1-enR is co-injected with Xlim1-enR and active type xlim-1 , wild type Xlim-1, wild typeアニマルキャップアッセイにおいてアクチビンprocessingでcitationき出こされるchordinとcerberusの発appearはXl The im1-enR suppressor is suppressed, and the wild-type Xlim-1 is suppressed and suppressed. Xlim-1はLdb1と全に4quantityをgeneratedするとされているが、Now this time I have obtained the resultはXlim-1がこの様な転write factor The functions of the complex and the functions of the future Xlim-1 are analyzed in detail and the necessity of the analysis is shown.