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Xlim-1の活性制御機構と他の転写因子との相互作用

Xlim-1活性控制机制及与其他转录因子的相互作用

基本信息

批准号：
10173205
负责人：
平良眞規
金额：
$ 1.92万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Xlim-1とその活性化因子Ldb1との共発現により、アニマルキャップにおいてgoosecoied(gsc)の発現が上昇し、さらにgscプロモーター・レポーター遺伝子が活性化されることより、gscはXlim-1の標的遺伝子と考えられる。またXlim-1とOtx2の組合せ、およびXlim-1,Ldb1,Otx2の組合せによってもレポーター遺伝子は協調的に活性化する。一方、GscとPV.1はその活性化に対し抑制的に働く。本研究ではこの実験系を用いXlim-1と他の転写関因子との相互作用と、各転写因子のgscプロモーター上の反応エレメントの解析を行うことで、Xlim-1を中心としたgscプロモーターの制御機構の解明を試みた。gscプロモーター上のXlim-1の結合部位は主としてUE、DE、PEの3つの領域に分けられる。そこでそれらを欠失させたレポーター遺伝子を用いてXlim-1とLdb1に対する反応性を調べた。その結果、UEの欠失、あるいはDEとPEを含む領域の欠失によりXlim-1/Ldb1あるいはXlim-1/Ldb1/Otx2によるgscプロモーターの活性化は大幅に減少することが示され、このことより複数の反応部位がXlim-1による活性化に必要であることが示唆された。次にDE中のOtx2/Gscの結合部位に変異を導入したコンストラクトについて検討したところ、Xlim-1/Ldb1/Otx2による活性化とPV.1による阻害効果はあまり影響されなかったが、Gscによる阻害は強く抑制された。このことはGscはDE領域への結合が阻害作用に必須であるのに対し、Xlim-1とOtx2にとっては必須でないことを示している。現在、PEの中のOtx2/Gscの結合部位に変異を導入したコンストラクトについて検討しているが、予備的実験ではこの変異はXlim-1/Otx2による活性化およびGscによる抑制には影響を与えないようである。そこでDEとPEの中のOtx2/Gscの結合部位の両方に変異を導入したコンストラクトを作成しさらに検討中である。またXlim-1とOtx2のタンパク質相互作用の可能性も考えられ酵母のtwo hybrid systemによる解析を始めている。

Xlim-1 and Ldb-1 co-occurrence, loss, loss Xlim-1, Otx2,Ldb-1,Otx-2,Ldb-1,Otx-2 One side, Gsc and PV.1 are activated and inhibited. In this study, the interaction between Xlim-1 and other writing factors and the analysis of the control mechanism of each writing factor are studied. The binding sites of Xlim-1 on gsc are mainly divided into three areas: UE, DE and PE. The two sides of the border are facing each other, and the two sides are facing each other. As a result, the deficiency of UE, DE and PE in the field of Xlim-1/Ldb1, Gsc in the field of Xlim-1/Ldb1/Otx2, Gsc in the field of Xlim-1, Gsc in the field of Xlim The binding site of Otx2/Gsc in DE is different from that of Xlim-1/Ldb1/Otx2, which is activated by PV.1 and inhibited by Gsc. The combination of Gsc and DE is necessary to prevent damage. Xlim-1 and Otx2 are necessary to prevent damage. Now, PE in Otx2/Gsc binding site changes in the introduction of different, prepared in the implementation of different Xlim-1/Otx2 activation, Gsc inhibition and influence. The difference between the binding site of Otx2/Gsc in DE and PE is introduced into the preparation of the present study. A study on the possibility of the interaction between Xlim-1 and Otx2 and the analysis of yeast two hybrid systems