Xlim-1の活性制御機構と他の転写因子との相互作用

Xlim-1活性控制机制及与其他转录因子的相互作用

基本信息

批准号：
10173205
负责人：
平良眞規
金额：
$ 1.92万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Xlim-1とその活性化因子Ldb1との共発現により、アニマルキャップにおいてgoosecoied(gsc)の発現が上昇し、さらにgscプロモーター・レポーター遺伝子が活性化されることより、gscはXlim-1の標的遺伝子と考えられる。またXlim-1とOtx2の組合せ、およびXlim-1,Ldb1,Otx2の組合せによってもレポーター遺伝子は協調的に活性化する。一方、GscとPV.1はその活性化に対し抑制的に働く。本研究ではこの実験系を用いXlim-1と他の転写関因子との相互作用と、各転写因子のgscプロモーター上の反応エレメントの解析を行うことで、Xlim-1を中心としたgscプロモーターの制御機構の解明を試みた。gscプロモーター上のXlim-1の結合部位は主としてUE、DE、PEの3つの領域に分けられる。そこでそれらを欠失させたレポーター遺伝子を用いてXlim-1とLdb1に対する反応性を調べた。その結果、UEの欠失、あるいはDEとPEを含む領域の欠失によりXlim-1/Ldb1あるいはXlim-1/Ldb1/Otx2によるgscプロモーターの活性化は大幅に減少することが示され、このことより複数の反応部位がXlim-1による活性化に必要であることが示唆された。次にDE中のOtx2/Gscの結合部位に変異を導入したコンストラクトについて検討したところ、Xlim-1/Ldb1/Otx2による活性化とPV.1による阻害効果はあまり影響されなかったが、Gscによる阻害は強く抑制された。このことはGscはDE領域への結合が阻害作用に必須であるのに対し、Xlim-1とOtx2にとっては必須でないことを示している。現在、PEの中のOtx2/Gscの結合部位に変異を導入したコンストラクトについて検討しているが、予備的実験ではこの変異はXlim-1/Otx2による活性化およびGscによる抑制には影響を与えないようである。そこでDEとPEの中のOtx2/Gscの結合部位の両方に変異を導入したコンストラクトを作成しさらに検討中である。またXlim-1とOtx2のタンパク質相互作用の可能性も考えられ酵母のtwo hybrid systemによる解析を始めている。

XLIM-1与其活化剂LDB1的共表达增加了动物帽中的Goosecoied（GSC）的表达，并且GSC启动子/报告基因基因被进一步激活，从而可以假设GSC是XLIM-1的靶基因。此外，XLIM-1，OTX2和XLIM-1，LDB1和OTX2的组合也协调激活了记者基因。另一方面，GSC和PV.1对它们的激活作用。在这项研究中，我们试图通过使用该实验系统与XLIM-1和其他转录因子相互作用，并分析每个转录因子的GSC启动子上的反应元件，以阐明以XLIM-1为中心的GSC启动子的调节机制。 XLIM-1在GSC启动子上的结合位点主要分为三个区域：UE，DE和PE。因此，已删除的报告基因用于检查对XLIM-1和LDB1的反应性。结果表明，含有DE和PE的区域的UE或缺失可显着降低XLIM-1/LDB1或XLIM-1/LDB1/OTX2的GSC启动子的激活，这表明需要多个反应性位点以通过XLIM-1激活XLIM-1。接下来，我们研究了DE中将突变引入OTX2/GSC的结合位点的结构，尽管XLIM-1/LDB1/OTX2的激活和PV.1的抑制作用没有显着影响GSC的抑制作用。这表明GSC对于与DE区域的抑制作用至关重要，而对于XLIM-1和OTX2来说并不是必需的。当前，我们正在研究一种在PE中otx2/gsc的结合位点引入突变的构建体，但是在初步实验中，该突变似乎不会影响XLIM-1/OTX2的激活以及GSC抑制。因此，我们目前正在开发一种构造，其中突变被引入DE和PE中的OTX2/GSC结合位点，目前正在进一步研究。 XLIM-1和OTX2蛋白相互作用也可能是可能的，并且使用两个混合系统开始对酵母进行分析。