中脳ドーパミンニューロンの発生と生存に関するマウス分子遺伝学的研究

中脑多巴胺神经元发育和存活的小鼠分子遗传学研究

• 批准号: 12031219
• 负责人: 小林 和人
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Fukushima Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12031219/
• 关键词: ドーパミン; パーキンソン病; チロシン水酸化酵素; 緑色蛍光タンパク質; 核内受容体; 条件的遺伝子ターゲティング

中脳ドーパミンニューロンの発生と生存の分子機構を明らかにするために、第一に、本ニューロンにおいて緑色蛍光タンパク質(GFP)を発現するトランスジェニックマウスを用いて、ドーパミンニューロンの単離法の開発を試みた。GFP発現トランスジェニックマウスの胎生期中脳より細胞懸濁液を調製し、セルソーターを用いてGFP陽性細胞を回収し、ドーパミンニューロンを濃縮することに成功した。この細胞集団は、細胞表面分子に対するモノクローナル抗体の作製や細胞特異的な遺伝子の単離に有益な研究材料となる。第二に、ドーパミンニューロンに発現する遺伝子のひとつとして、核内受容体Nurr1の機能解析を行なった。本受容体のドーパミンニューロンのマーカー遺伝子であるチロシン水酸化酵素(TH)遺伝子の発現を調節する可能性を検討した。培養細胞を用いた解析により、Nurr1はTH遺伝子の転写を促進することを明らかにし、この活性化に関係する少なくともひとつの応答配列を同定した。第三に、ドーパミンニューロンに発現する遺伝子機能の解析のために、細胞特異的な遺伝子ターゲティング系の開発を試みた。TH遺伝子プロモーターの下流にCre組換え酵素を接続した融合遺伝子を用いて複数のトランスジェニックマウス系統を作製した。レポーターマウスとの交配により遺伝子組換えの組織分布を検討し、ドーパミンニューロンにおいて組換えを誘導するトランスジェニックマウス系統を樹立した。本系統は、今後、ドーパミンニューロンにおける遺伝子機能の解明のために重要な実験系を提供する。

The molecular mechanism for the development and survival of the middle and lower reaches of the middle reaches of the middle reaches GFP expression in the embryonic period of the cell suspension was modulated, and the GFP positive cells were recovered and concentrated successfully. These cell clusters are useful as research materials for cell surface molecular responses and for the production of cell-specific proteins. Second, the function analysis of the nuclear receptor Nurr1 was carried out. To investigate the possibility of regulating the expression of the enzyme TH in the receptor Culture of cells in the middle of the analysis, Nurr1 TH gene writing promotion, and the development of the relationship between the two, and the response to the same set of Third, the analysis of gene function in the development of cell specific gene system The downstream of TH gene is Cre group enzyme, which is used to control the system of TH gene The tissue distribution model of the mating process and the induction process of the mating process are established. This system provides an important information system for the future development of communication functions.

项目成果

Kobayashi,K.and Yasoshima,Y: "The central noradrenaline system and memory consolidation."Neuroscientist. (in press). (2001)

Kobayashi,K. 和 Yasoshima,Y：“中枢去甲肾上腺素系统和记忆巩固。”神经科学家。

小林和人: "ドーパミン最新の話題(永津俊治編),Excerpta Medica"ドーパミン欠損遺伝子変異マウスにおける脳機能障害. 113 (2000)

Kazuto Kobayashi：“关于多巴胺的最新主题（由 Shunji Nagatsu 编辑），Excerpta Medica” 多巴胺缺陷基因突变小鼠的脑功能障碍 113 (2000)。

Kobayashi,K.: "Role of catecholamine signaling in brain and nervous system functions : new insights from mouse molecular genetic study."J.Invest.Dermatol.. (in press). (2001)

Kobayashi,K.：“儿茶酚胺信号传导在大脑和神经系统功能中的作用：小鼠分子遗传学研究的新见解。”J.Invest.Dermatol..（出版中）。

Iwawaki, T.et al.: "Identification of a potential Nurr1 response element that activates the tyrosine hydroxylase gene promoter in cultured cells"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 274・3. 590-595 (2000)

Iwawaki, T. 等：“在培养细胞中激活酪氨酸羟化酶基因启动子的潜在 Nurr1 反应元件的鉴定”Biochem.Biophys.Res.Commun. 274・3 (2000)。

Kobayashi,K.and Nagatsu,T.: "Progress in Gene Therapy-Basic and Clinical Frontiers-(ed., Bertolotti, R.)"Transgenic rescue of tyrosine hydroxylase-deficient mice : application for generating animal models with catecholamine dystunction.. 556 (2000)

Kobayashi,K. 和 Nagatsu,T.：“基因治疗的进展 - 基础和临床前沿 -（编辑，Bertolotti，R.）”酪氨酸羟化酶缺陷小鼠的转基因拯救：用于生成儿茶酚胺功能障碍动物模型的应用。