イムノトキシン細胞標的法の霊長類脳機能研究への応用

免疫毒素细胞靶向方法在灵长类脑功能研究中的应用

• 批准号: 16650070
• 负责人: 小林 和人
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Fukushima Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16650070/
• 关键词: イムノトキシン細胞標的法; インターロイキン-2受容体; 脳神経回路; 霊長類; 組換え体ウイルス; 線条体; 高次脳機能; 神経回路; アデノウイルスベクター; レンチウイルスベクター; 逆行性輸送; サル

イムノトキシン細胞標的法は、遺伝子発現の特異性に基づいて特定のニューロンを神経回路から除去するための遺伝子改変技術である。この手法では、細胞タイプに特異的な遺伝子プロモーターを用いて、組換え体イムノトキシンanti-Tac(Fv)-PE40の標的分子であるヒトインターロイキン-2受容体αサブユニット(IL-2Rα)を発現するトランスジェニックマウスを作製し、この動物にイムノトキシンを投与することによって標的細胞タイプの破壊を誘導する。本研究では、高次脳機能の仕組みの解明や疾患モデル開発において有意義な実験系を提供するサルを利用して、脳神経回路における特定経路の役割を研究するために、イムノトキシン細胞標的法を応用した新しいアプローチ(イムノトキシン神経路標的法)の開発に取り組む。本年度は、逆行性に導入遺伝子を発現させるための組換え体ウイルスベクターシステムについて検討するため、GFPあるいはヒトIL-2Rα/YFPを導入遺伝子とするHIVタイプ1由来の組換え体レンチウイルスを作製した。これらの組換え体ウイルスは培養細胞において高い感染効率を示した。組換え体ウイルスをニホンザルの線条体に注入し、さまざまな脳部位での導入遺伝子の発現を解析した。注入部位である線条体において多数の細胞にウイルスの感染が観察され、黒質網様部や淡蒼球にも順行性の標識が観察された。また、黒質緻密部における一部の細胞にも逆行性に感染し、これらの細胞において導入遺伝子を発現することが観察された。以上の結果は、HIVタイプ1由来のレンチウイルスを用いることによって、逆行性に導入遺伝子を発現させることが可能であることが示された。今後、このような処理を行ったサルの黒質緻密部にイムノトキシンを注入し、黒質-線条体路を選択的に除去する実験系を開発する計画である。

イ ム ノ ト キ シ ン は cell mark method, but 伝 発 is の specificity に base づ い て specific の ニ ュ ー ロ ン を god 経 loop か ら remove す る た め の heritage 伝 child change - technology で あ る. こ の gimmick で は, cell タ イ プ に な of specific 伝 son プ ロ モ ー タ ー を with い て, group in え イ ム ノ ト キ シ ン anti - Tac (Fv) - PE40 の target molecules で あ る ヒ ト イ ン タ ー ロ イ キ ン - 2 by the capacity of body alpha サ ブ ユ ニ ッ ト alpha (IL - 2 r) を 発 now す る ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス を し, こ の animal に イ ム ノ ト キ シ ン を cast with す る こ と に よ っ て target cells タ イ プ の broken 壊 を induced す る. This study で は 脳 function, high times の blackstone group み の interpret や disorders モ デ ル open 発 に お い て meaningful な be 験 す を provide る サ ル を using し て 脳 経 god, loop に お け る 経 road cut を の service specific research す る た め に, イ ム ノ ト キ シ ン cell mark method を 応 with し た new し い ア プ ロ ー チ (イ ム ノ ト キ シ ン god 経 road signs) の open 発 に taking Youdaoplaceholder0 group む. This year は, retrograde に import legacy 伝 son を 発 now さ せ る た め の group in え body ウ イ ル ス ベ ク タ ー シ ス テ ム に つ い て beg す 検 る た め, GFP あ る い は ヒ ト IL - 2 r alpha/YFP を import legacy 伝 son と す る HIV タ イ プ 1 origin の group in え body レ ン チ ウ イ ル ス を cropping し た. The <s:1> れら in several groups of interchangeover え ウ ス ス ス cultured cells にお て て high <s:1> infection efficacy を indicates that the た た is high. Group in え body ウ イ ル ス を ニ ホ ン ザ ル の line body に injection し, さ ま ざ ま な 脳 parts で の import legacy 伝 son の 発 now を parsing し た. Injection parts で あ る line body に お い て most の cells に ウ イ ル ス の infection が 観 examine さ れ others, black quality web や light pale ball に も anterograde の logo が 観 examine さ れ た. ま た, black mass density に お け る a の cells に も retrograde し に infection, こ れ ら の cells に お い て import legacy 伝 son を 発 now す る こ と が 観 examine さ れ た. は の results above, HIV タ イ プ 1 origin の レ ン チ ウ イ ル ス を with い る こ と に よ っ て, retrograde に import legacy 伝 son を 発 now さ せ る こ と が may で あ る こ と が shown さ れ た. In the future, こ の よ う な 処 Richard を line っ た サ ル の black mass compacta に イ ム ノ ト キ シ ン を injection し, black mass - line road を sentaku に remove す る be 験 started を 発 す る project で あ る.

项目成果

The Primer on the Autonomic Nervous System

自主神经系统入门

• 发表时间: 2004
• 作者: Kobayashi;K.;Nagatsu;T.
• 通讯作者: T.

Functional properties of dopaminergic neurons in the mouse olfactory bulb

小鼠嗅球多巴胺能神经元的功能特性

• 发表时间: 2005
• 期刊: J.Physiol. (in press)
• 作者: Pignatelli;A. et al.
• 通讯作者: A. et al.

Isolation and transplantation of dopaminergic neurons generated from mouse embryonic stem cells

• DOI: 10.1016/j.neulet.2004.03.074
• 发表时间: 2004-06-03
• 期刊: NEUROSCIENCE LETTERS
• 影响因子: 2.5
• 作者: Yoshizaki, T;Inaji, M;Okano, H
• 通讯作者: Okano, H

イムノトキシン細胞標的法:神経回路メカニズムの解析法

免疫毒素细胞靶向方法：神经回路机制分析方法

• 发表时间: 2004
• 期刊: 脳21 7・2
• 作者: 佐野裕美;小林和人;小林和人
• 通讯作者: 小林和人

Fate of transient catecholaminergic cell types revealed by site-specific recombination in transgenic mice

• DOI: 10.1002/jnr.20229
• 发表时间: 2004-10-01
• 期刊: JOURNAL OF NEUROSCIENCE RESEARCH
• 影响因子: 4.2
• 作者: Matsushita, N;Kobayashi, K;Kobayashi, K
• 通讯作者: Kobayashi, K