GFP発現トランスジェニックマウスを利用した選択的神経細胞死の解析

使用表达 GFP 的转基因小鼠分析选择性神经元细胞死亡

• 批准号: 11157221
• 负责人: 小林 和人
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Fukushima Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11157221/
• 关键词: green fluorescence protein; チロシン水酸化酵素; ドーパミンニューロン; 神経栄養因子; 神経細胞死; トランスジェニックマウス

パーキンソン病で変性・脱落することで知られる中脳ドーパミン神経を対象に、クラゲ由来の生体蛍光タンパク質であるgreen fluorescence protein(GFP)を用いて、本ニューロンの生存あるいは神経細胞死を検出する新しいシステムの確立を試みた。ドーパミン合成の律速酵素であるチロシン水酸化酵素(TH)の遺伝子プロモーターの組織特異的な遺伝子発現の活性を利用し、中脳ドーパミンニューロンにおいてGFPを発現するトランスジェニックマウス系統(32系統)を作製した。これらのうち2系統に、中脳ドーパミンニューロンにおけるGFPの発現が検出された。GFPによる神経細胞の生存をモニターするモデル実験として、TH-GFPトランスジェニックマウスの中脳基板より初代培養細胞を調製し、培養下での神経細胞の生存がグリア細胞株由来神経栄養因子(GDNF)によって促進される過程をGFPの蛍光を利用して解析した。GDNFの存在によって、GFP陽性細胞の生存率は、培養後4日で2.5倍に、培養後7日で4倍に増加した。以上の結果から、TH-GFPマウスを用いて、特定神経細胞の生存をリアルタイムで検出できることが示された。本検出システムは、神経細胞の生存に関係する種々の因子の解析のために、今後有効な実験系を提供する。

In the case of a disease, the nature of the disease, the shedding of the disease, and the identification of the origin of the disease, the use of green fluorescence protein(GFP), the survival of the disease, and the detection of the death of the brain cells. The activity of tissue-specific gene expression in the synthesis of tachyzyme (TH) was controlled by the use of GFP gene expression system (32 systems) in the synthesis of TH. The GFP gene was detected in the middle of the system. The survival of GFP cells in culture is promoted by the process of regulation of primary cultured cells and analysis of GFP light in culture. In the presence of GDNF, the survival rate of GFP positive cells increased by 2.5 fold at 4 days and 4 fold at 7 days after culture. The above results show that TH-GFP can be used in the survival of specific neurons. The present study provides information on the analysis of factors related to the survival of neurons, and provides information on future development.

项目成果

Kobayashi et al.: "Dopamine deficincy in mice"Brain Dev.. 21. 1-6 (1999)

小林等：“小鼠多巴胺缺乏症”Brain Dev.. 21. 1-6 (1999)

Kobayashi et al.: "Modest neuropsychological deficits caused by reduced noradrenaline metabolism in mice heterozygous for a mutated tyrosine hydroxylase gene."J. Neurosci.. 20(6). 2418-2426 (2000)

Kobayashi 等人：“酪氨酸羟化酶基因突变杂合子小鼠的去甲肾上腺素代谢减少导致中度神经心理缺陷。”J.