GFP発現トランスジェニックマウスを利用した選択的神経細胞死の解析

使用表达 GFP 的转基因小鼠分析选择性神经元细胞死亡

• 批准号: 11157221
• 负责人: 小林 和人
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Fukushima Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11157221/
• 关键词: green fluorescence protein; チロシン水酸化酵素; ドーパミンニューロン; 神経栄養因子; 神経細胞死; トランスジェニックマウス

パーキンソン病で変性・脱落することで知られる中脳ドーパミン神経を対象に、クラゲ由来の生体蛍光タンパク質であるgreen fluorescence protein(GFP)を用いて、本ニューロンの生存あるいは神経細胞死を検出する新しいシステムの確立を試みた。ドーパミン合成の律速酵素であるチロシン水酸化酵素(TH)の遺伝子プロモーターの組織特異的な遺伝子発現の活性を利用し、中脳ドーパミンニューロンにおいてGFPを発現するトランスジェニックマウス系統(32系統)を作製した。これらのうち2系統に、中脳ドーパミンニューロンにおけるGFPの発現が検出された。GFPによる神経細胞の生存をモニターするモデル実験として、TH-GFPトランスジェニックマウスの中脳基板より初代培養細胞を調製し、培養下での神経細胞の生存がグリア細胞株由来神経栄養因子(GDNF)によって促進される過程をGFPの蛍光を利用して解析した。GDNFの存在によって、GFP陽性細胞の生存率は、培養後4日で2.5倍に、培養後7日で4倍に増加した。以上の結果から、TH-GFPマウスを用いて、特定神経細胞の生存をリアルタイムで検出できることが示された。本検出システムは、神経細胞の生存に関係する種々の因子の解析のために、今後有効な実験系を提供する。

我们试图建立一个新系统，用于检测中脑多巴胺神经的生存或神经元细胞死亡，该系统使用绿色荧光蛋白（GFP）（一种从水母中衍生而来的生物荧光蛋白）而闻名，并以退化和脱离帕金森氏病而闻名。使用多巴胺合成的基因启动子的速率限制酶酪氨酸羟化酶（TH）的基因启动子的组织特异性基因表达活性，我们创建了一种转基因小鼠菌株（32条线），在中脑多巴胺神经元中表达GFP。其中两条线检测到中脑多巴胺神经元中的GFP表达。作为一个模型实验，可以通过GFP监测神经元存活，从TH-GFP转基因小鼠的中脑底物制备原代培养细胞，并使用GFP荧光分析了通过神经胶质细胞系衍生的神经营养因子（GDNF）促进培养中神经元存活的过程。 GDNF的存在使GFP阳性细胞的存活率增加了2.5倍，在培养后4天，培养后7天4倍。以上结果表明，使用TH-GFP小鼠可以实时检测特定神经元的存活。检测系统提供了一个未来有效的实验系统，用于分析涉及神经元存活的各种因素。

项目成果

Kobayashi et al.: "Dopamine deficincy in mice"Brain Dev.. 21. 1-6 (1999)

小林等：“小鼠多巴胺缺乏症”Brain Dev.. 21. 1-6 (1999)