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神経栄養因子による中枢神経細胞死の防御における細胞内シグナルの解析

神经营养因子预防中枢神经细胞死亡的细胞内信号分析

基本信息

批准号：
12031212
负责人：
畠中寛
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

培養下の大脳皮質ニューロンにアデノウイルスを感染させたところ、1日後よりその発現が観察された。BDNFによってチロシンリン酸化される細胞内蛋白質への効果を調べるために、BDNF添加前と添加後とで細胞内蛋白質を抽出し、抗リン酸化チロシン抗体でウェスタンブロティングを行った。その結果、C/S mutantを発現させた大脳皮質ニューロンにおいては、2種の蛋白質においてのみチロシンリン酸化の増強が観察された。この結果は、Shp-2が特定の蛋白質を基質としており、その基質特異性が高いことを示している。続いて、Shp-2と会合している蛋白質への効果を明らかにする目的で、抗Shp-2抗体を用いて免疫沈降を行い、抗リン酸化チロシン抗体でウェスタンブロティングを行った。その結果、C/S mutantを発現している大脳皮質ニューロンでは、少なくとも4種の蛋白質のチロシンリン酸化が増強していた。これらの蛋白質はShp-2の基質と考えられる。そのなかで、68kDa付近の蛋白質は、その分子量から推測すると、Shp-2自身と考えられた。また、83kDa付近の蛋白質はBIT/SHPS-1と考えられた。そこで、BIT/SHPS-1のチロシンリン酸化状態を、同様に抗BIT/SHPS-1抗体を用いて調べたところ、C/SおよびΔP mutantを発現している大脳皮質ニューロンにおいてそのチロシンリン酸化が顕著に増強していた。このことは大脳皮質ニューロンにおいてShp-2はBIT/SHPS-1を基質としていることを示している。これら以外の2種のリン酸化蛋白質は現在のところ不明である。一方、Trkのチロシンリン酸化については、Shp-2のwild typeおよびC/S mutantは影響を及ぼさなかった。さらにGrb2と結合している蛋白質のチロシンリン酸化状態についても解析したが、それらの蛋白質のチロシンリン酸化状態には、違いは観察されなかった。このことは、Shp-2はTrkやGrb2と相互作用しうることが報告されているが、TrkやGrb2と結合しているリン酸化された蛋白質を基質としていないことを示している。

After culture, the cortical skin of the big skin was infected, and the infection showed up after 1 day. BDNF is used to acidify the intracellular protein and is used to regulate the effect of BDNF before adding BDNF. After addition, the intracellular protein was extracted and the anti-リン acidified チロシン antibody was extracted.そのRESULT,C/S mutant を発appears させた大脳cortical ニューロンにおいては、2 Kind of protein においてのみチロシンリン acidification のincrease strength が観看された.このRESULTは, Shp-2がspecificのproteinをstromaとしており, そのmatrix specificityが高いことをshowしている.続いて、Shp-2と合しているproteinへのeffectを明らかにするpurposeで、anti-Shp-2 anti In vivo immunoprecipitation tests and anti-Rinolytic acid immunoprecipitation antibodies are available.そのRESULT,C/S Mutant を発appears している大脳cortical ニューロンでは, 小なくとも4 kinds of protein のチロシンリンacidified がincreased strength していた.これらのproteinはShp-2のstromaと考えられる.そのなかで, 68kDa close protein は, そのmolecular weight から speculated すると, Shp-2 itself とtest えられた.また、83kDa close protein はBIT/SHPS-1 とtest えられた.そこで、BIT/SHPS-1のチロシンリンacidified state を、同様にanti-BIT/SHPS-1 antibody を Used いてadjusted べたところ、C/S およびΔP mutant を発appears している大脳cortical ニューロンにおいてそのチロシンリンacidified が顕与に姗强していた.このことは大脳Cortical ニューロンにおいてShp-2はBIT/SHPS-1をMatrix としていることを Show している. There are two kinds of のリン acidified protein other than これら, and the current のところ is unknown. One side, Trk's のチロシンリンacidified については, Shp-2's wild type およびC/S mutant は's influence を and ぼさなかった.さらにGrb2とBinding and analysis of protein acidification stateたが, それらのprotein のチロシンリン acidified state には, violative いは観看されなかった. T rkやGrb2とbindingしているリンacidifiedされたproteinをmatrixとしていないことをshowsしている.