神経栄養因子による中枢神経細胞死の防御における細胞内シグナルの解析

神经营养因子预防中枢神经细胞死亡的细胞内信号分析

• 批准号: 12031212
• 负责人: 畠中 寛
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12031212/
• 关键词: BDNF; アデノウイルス; チロシンリン酸化; SHP-2; チロシンフォスファターゼ; 大脳皮質; ニューロトロフィン; 神経細胞死

培養下の大脳皮質ニューロンにアデノウイルスを感染させたところ、1日後よりその発現が観察された。BDNFによってチロシンリン酸化される細胞内蛋白質への効果を調べるために、BDNF添加前と添加後とで細胞内蛋白質を抽出し、抗リン酸化チロシン抗体でウェスタンブロティングを行った。その結果、C/S mutantを発現させた大脳皮質ニューロンにおいては、2種の蛋白質においてのみチロシンリン酸化の増強が観察された。この結果は、Shp-2が特定の蛋白質を基質としており、その基質特異性が高いことを示している。続いて、Shp-2と会合している蛋白質への効果を明らかにする目的で、抗Shp-2抗体を用いて免疫沈降を行い、抗リン酸化チロシン抗体でウェスタンブロティングを行った。その結果、C/S mutantを発現している大脳皮質ニューロンでは、少なくとも4種の蛋白質のチロシンリン酸化が増強していた。これらの蛋白質はShp-2の基質と考えられる。そのなかで、68kDa付近の蛋白質は、その分子量から推測すると、Shp-2自身と考えられた。また、83kDa付近の蛋白質はBIT/SHPS-1と考えられた。そこで、BIT/SHPS-1のチロシンリン酸化状態を、同様に抗BIT/SHPS-1抗体を用いて調べたところ、C/SおよびΔP mutantを発現している大脳皮質ニューロンにおいてそのチロシンリン酸化が顕著に増強していた。このことは大脳皮質ニューロンにおいてShp-2はBIT/SHPS-1を基質としていることを示している。これら以外の2種のリン酸化蛋白質は現在のところ不明である。一方、Trkのチロシンリン酸化については、Shp-2のwild typeおよびC/S mutantは影響を及ぼさなかった。さらにGrb2と結合している蛋白質のチロシンリン酸化状態についても解析したが、それらの蛋白質のチロシンリン酸化状態には、違いは観察されなかった。このことは、Shp-2はTrkやGrb2と相互作用しうることが報告されているが、TrkやGrb2と結合しているリン酸化された蛋白質を基質としていないことを示している。

Fostering の big 脳 cortex ニ ュ ー ロ ン に ア デ ノ ウ イ ル ス を infection さ せ た と こ ろ, 1st よ り そ の 発 now が 観 examine さ れ た. BDNF に よ っ て チ ロ シ ン リ ン acidification さ れ る intracellular protein へ の unseen fruit を adjustable べ る た め に, BDNF add と before add after と で intracellular protein を spare し, resisting リ ン acidification チ ロ シ ン antibody で ウ ェ ス タ ン ブ ロ テ ィ ン グ を line っ た. そ の results, C/S mutant を 発 now さ せ た big 脳 cortex ニ ュ ー ロ ン に お い て は, two の protein に お い て の み チ ロ シ ン リ ン acidification の raised strong が 観 examine さ れ た. こ の results は, Shp - 2 を が の specific protein matrix と し て お り, そ の high substrate specificity が い こ と を shown し て い る. Meet 続 い て, Shp - 2 と し て い る protein へ の unseen fruit を Ming ら か に す で る purpose, Shp - 2 antibody を with い て immune sink を line い, resisting リ ン acidification チ ロ シ ン antibody で ウ ェ ス タ ン ブ ロ テ ィ ン グ を line っ た. そ の results, C/S mutant を 発 now し て い る big 脳 cortex ニ ュ ー ロ ン で は, less な く と も four の protein の チ ロ シ ン リ ン acidification が raised strong し て い た. Youdaoplaceholder3 れら れら れら protein Shp-2 <s:1> matrix と study えられる. Youdaoplaceholder0 な な で で, 68kDa parapylate <s:1> protein な, そ <s:1> molecular weight ら ら speculation すると, Shp-2 itself と study えられた. Youdaoplaceholder0, 83kDa is close to the <s:1> protein と BIT/SHPS-1と to えられた. そ こ で, BIT/SHPS - 1 の チ ロ シ ン リ ン acidification を, with others in に BIT resistance/SHPS - 1 antibodies を い て adjustable べ た と こ ろ, C/S お よ び Δ P mutant を 発 now し て い る big 脳 cortex ニ ュ ー ロ ン に お い て そ の チ ロ シ ン リ ン acidification が 顕 the に raised strong し て い た. こ の こ と は big 脳 cortex ニ ュ ー ロ ン に お い て Shp - 2 は BIT / を SHPS - 1 matrix と し て い る こ と を shown し て い る. In addition to <s:1> れら, <s:1> two types of <s:1> リ <s:1> acidified proteins <e:1> are now unclear in <s:1> と and ろ である. One party, the Trk の チ ロ シ ン リ ン acidification に つ い て は, Shp - 2 の wild type お よ び C/S mutant は influence を and ぼ さ な か っ た. さ ら に Grb2 と combining し て い る protein の チ ロ シ ン リ ン acidification condition に つ い て も parsing し た が, そ れ ら の protein の チ ロ シ ン リ ン acidification condition に は, breach い は 観 examine さ れ な か っ た. こ の こ と は, Shp - 2 は Trk や Grb2 と interaction し う る こ と が report さ れ て い る が, Trk や Grb2 と combining し て い る リ ン acidification さ れ を た protein matrix と し て い な い こ と を shown し て い る.

项目成果

西尾チカ: "Involvement of cystatin C in oxidative stress-induced apoptosis of cultured rat CNS neurons."Brain Res.,. 873,. 252-262. (2000)

Chika Nishio：“半胱氨酸蛋白酶抑制剂 C 参与氧化应激诱导的培养大鼠中枢神经系统细胞凋亡”，Brain Res.，252-262。

稲村直子: "The role of p53 in DNA strand break-induced apoptosis in organotypic slice cultures from the mouse cerebellum."J.Neurosci.Res.,. 60,. 450-457. (2000)

Naoko Inamura：“p53 在小鼠小脑器官切片培养物中 DNA 链断裂诱导的细胞凋亡中的作用”，J.Neurosci.Res., 450-457。

荒木敏行: "Role of phosphatase activity of Shp-2 in BDNF signaling in cultured cerebral cortical neurons."J.Neurochem.,. 74,. 659-668. (2000)

Toshiyuki Araki：“Shp-2 在培养的大脑皮层神经元中 BDNF 信号传导的作用”，J.Neurochem 74，（2000）。

山岸覚: "p38 Mitogen-activated protein kinase regulates low potassium-induced apoptosis in cultured cerebellar granule neurons."J.Biol.Chem.,. 276,. 5129-5133. (2001)

Satoru Yamagishi：“p38 丝裂原激活蛋白激酶调节培养的小脑颗粒神经元中的低钾诱导的细胞凋亡。”J.Biol.Chem., 5129-5133。

石川保幸: "Brain-derived neurotrophic factor accelerates nitric oxide donor-induced apoptosis of cultured cortical neurons."J.Neurochem.,. 75,. 494-502. (2000)

Yasuyuki Ishikawa：“脑源性神经营养因子加速一氧化氮供体诱导的培养皮质神经元的细胞凋亡。”J.Neurochem., 494-502。