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神経栄養因子による中枢神経細胞死の防御における細胞内シグナルの解析

神经营养因子预防中枢神经细胞死亡的细胞内信号分析

基本信息

批准号：
12031212
负责人：
畠中寛
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

培養下の大脳皮質ニューロンにアデノウイルスを感染させたところ、1日後よりその発現が観察された。BDNFによってチロシンリン酸化される細胞内蛋白質への効果を調べるために、BDNF添加前と添加後とで細胞内蛋白質を抽出し、抗リン酸化チロシン抗体でウェスタンブロティングを行った。その結果、C/S mutantを発現させた大脳皮質ニューロンにおいては、2種の蛋白質においてのみチロシンリン酸化の増強が観察された。この結果は、Shp-2が特定の蛋白質を基質としており、その基質特異性が高いことを示している。続いて、Shp-2と会合している蛋白質への効果を明らかにする目的で、抗Shp-2抗体を用いて免疫沈降を行い、抗リン酸化チロシン抗体でウェスタンブロティングを行った。その結果、C/S mutantを発現している大脳皮質ニューロンでは、少なくとも4種の蛋白質のチロシンリン酸化が増強していた。これらの蛋白質はShp-2の基質と考えられる。そのなかで、68kDa付近の蛋白質は、その分子量から推測すると、Shp-2自身と考えられた。また、83kDa付近の蛋白質はBIT/SHPS-1と考えられた。そこで、BIT/SHPS-1のチロシンリン酸化状態を、同様に抗BIT/SHPS-1抗体を用いて調べたところ、C/SおよびΔP mutantを発現している大脳皮質ニューロンにおいてそのチロシンリン酸化が顕著に増強していた。このことは大脳皮質ニューロンにおいてShp-2はBIT/SHPS-1を基質としていることを示している。これら以外の2種のリン酸化蛋白質は現在のところ不明である。一方、Trkのチロシンリン酸化については、Shp-2のwild typeおよびC/S mutantは影響を及ぼさなかった。さらにGrb2と結合している蛋白質のチロシンリン酸化状態についても解析したが、それらの蛋白質のチロシンリン酸化状態には、違いは観察されなかった。このことは、Shp-2はTrkやGrb2と相互作用しうることが報告されているが、TrkやGrb2と結合しているリン酸化された蛋白質を基質としていないことを示している。

In culture, the large cortex was infected with the virus, and the virus was detected one day later. BDNF is a protein inhibitor that regulates intracellular protein production before and after BDNF is added. As a result, C/S mutants were found in the cortex, and two kinds of proteins were found in the cortex. As a result, Shp-2 has a high specificity for specific protein substrates. In addition, the anti-Shp-2 antibody can be used for immunoprecipitation, and the anti-Shp-2 antibody can be used for protein synthesis. As a result, C/S mutant was found in the middle of the cortex and increased in the middle of the cortex. The protein content of Shp-2 was higher than that of protein. The molecular weight of the 68kDa protein was estimated to be about 100 kDa, and Shp-2 itself was estimated to be about 100 kDa. 83kDa protein was detected in BIT/SHPS-1. In addition, BIT/SHPS-1 antibody was used to modulate the expression of C/S and ΔP mutants. Shp-2 is the basic material of SHPS-1. 2 kinds of acidified proteins are unknown. One side, Trk, Trk. In addition, Grb2 binding to the protein in the acidic state of the protein in the analysis, all protein in the acidic state of the protein in the analysis, in violation of the detection. Trk Grb2 interaction, Trk Grb2 interaction, Trp Grb2 interaction, Trp Grb2 interaction, Trb2 interaction, Trp Grb2 interaction,