造血幹細胞のアポトーシス及び細胞周期の転写因子による制御機構の解明

阐明转录因子调控造血干细胞凋亡和细胞周期的机制

• 批准号: 12036209
• 负责人: 犬飼 岳史
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: 山梨医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12036209/
• 关键词: 造血幹細胞; アポトーシス; 細胞周期; 転写因子; E2A-HLF; SLUG遺伝子; プロモーター

造血系幹細胞の維持に転写因子が重要な役割を担っていると考えられる。我々は、線虫のCES2アポトーシス制御遺伝子のヒト相同遺伝子の研究を行い、CES2の下流遺伝子であるCES1と相同性のあるSLUG転写因子が、E2A-HLF融合転写因子の下流遺伝子でありアポトーシスを抑制することを明らかにした。本年度は、E2A-HLFによるSLUG遺伝子誘導の機序を明確にするためにSLUG遺伝子の解析を行った。5'RACE解析ではORFが共通した3種類のsplicing formがあり、RT-PCR解析では転写開始点が共通した118bpのsplice outの有無による2つのsplicing formがmajorな転写産物であった。転写開始点上流にはTATA boxはなくCpG islandが存在しメチル化による制御も示唆された。さらに上流にマウスと相同性をもつ領域が散在し、約1kbの上流領域は特に高い相同性を示した。この部位にはE2A-HLFの結合配列HLF-CS related siteが集蔟し、特に2つのsiteがoverlapする形で存在し、線虫CES1遺伝子promoterのHLF-CS related siteとも類似していた。この領域をprobeとしたGel-shift法でE2A-HLFの特異的結合を確認した。一方、17;19転座型白血病由来HAL-O1株は、E2A-HLFのDNA結合ドメインにpoint mutationを含有しHLF-CS related sequenceに対する結合能力が低下しておりSLUG遺伝子の発現が著しく弱い。そこでGel-shift法で検討したところ、HAL-O1型のE2A-HLFはSLUG遺伝子内のHLF-CS related siteへの結合が著明に減弱しており、HAL-O1細胞でのSLUG遺伝子の発現が著しく弱いことの一因である可能性が示唆された。現在解析を継続中である。

Hematopoietic stem cell maintenance factors are important for the development of hematopoietic stem cells. We have conducted research on the identity of CES2, CES1 and CES2 downstream genes, SLUG, E2A-HLF fusion, and CES2 downstream genes. This year, the E2A-HLF gene induction mechanism was clarified and the SLUG gene analysis was carried out. 5'RACE analysis is common to ORFs with 3 types of splicing forms, RT-PCR analysis is common to start points with 118bp and splice out with or without 2 types of splicing forms with major splicing products. TATA box upstream of the start point of writing is not available for CpG island. The upper part of the field is scattered, and the upper part of the field is about 1kb. These sites are similar to E2A-HLF and HLF-CS related sites. This domain probe is used to confirm the specific binding of E2A-HLF by Gel-shift method. On the other hand, the HAL-O1 strain derived from 17;19 leukea leukemia has a low binding ability due to the inclusion of a point mutation in the E2A-HLF DNA binding region and the HLF-CS related sequence, so the discovery of SLUG genes is extremely weak. The Gel-shift method was used to detect HAL-O1 E2A-HLF and HLF-CS related sites in SLUG gene. The binding of HLF-CS related sites in SLUG gene in HAL-O1 cells was clearly weakened. The possibility of SLUG gene expression in HAL-O1 cells was also demonstrated. Now analyze.

项目成果

T.Shinjyo,T Inukai,T.Inaba et al: "Downregulation of Bim, a proapoptotic relative of Bcl-2, is a pivotal step in cytokine-induced survival signaling in murine hematopoietic progenitors."Molecular and Cellular Biology. 21. 854-864 (2001)

T.Shinjyo、T Inukai、T.Inaba 等人：“Bim（Bcl-2 的促凋亡相关物）的下调是小鼠造血祖细胞中细胞因子诱导的生存信号传导的关键步骤。”分子和细胞生物学。

T.Inukai,K.Sugita,S.Nakazawa et al: "Participation of granulocyte colony-stimulating factor in the growth regulation of leukemia cells from Philadelphia chromosome-positive acute leukemia and blast crisis of chronic myeloid leukemia."Leukemia. 14. 1386-13

T.Inukai，K.Sugita，S.Nakazawa 等人：“粒细胞集落刺激因子参与费城染色体阳性急性白血病和慢性粒细胞白血病急变期白血病细胞的生长调节。”白血病。