造血幹細胞増殖因子の同定と造血幹細胞のex vivo培養法の確立

造血干细胞生长因子的鉴定及造血干细胞离体培养方法的建立

• 批准号: 12036226
• 负责人: 戸所 一雄
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12036226/
• 关键词: 幹細胞; 造血; 自己複製因子

造血幹細胞のself-renewal(自己複製)因子(膜蛋白質)の同定による造血幹細胞のex vivo培養増幅法の確立を目指して、マウス造血幹細胞の性状解析を行い以下の点を明らかにした。(1)最近Peschleらはヒト骨髄中のCD34^+Flk1^+細胞が造血幹細胞であると報告した。しかし、マウス骨髄中にはCD34^+Flk1^+細胞は極少数しか存在せず、Hoechst33342^-細胞(SP細胞)とは重複分画ではなかった。マウスSP細胞(Hoechst^-Rhodamine^-細胞)は放射線照射マウスで造血再構成ができたものの、マウスCD34^+Flk1^+細胞は出来なかった。従ってマウスではCD34^+Flk1^+細胞は造血幹細胞ではないと考えられた。(2)マウス骨髄Hoechst^-Rhodamine^-細胞(SP細胞)を、あるストローマ細胞上で何らサイトカインを添加することなく共培養行った。その結果6ヶ月以上に渡りcobble stone様コロニーを形成しながら長期培養増幅することが可能であった。増幅した細胞集団の中には、SP細胞もLin^-Scal^+c-Kit^+CD34^-細胞もLin^-Scal^+cKit^+CD34^+細胞も存在が確認できた。従ってマウス造血幹細胞のex vivo培養が特定条件下では可能と考えられた。(3)長期共培養した後単離したSP細胞を再びストローマ細胞上で共培養してもcobble stone様コロニーはできなかった。しかし長期培養後のLin^-Scal^+c-Kit^+CD34^-細胞やLin^-Scal^+cKit^+CD34^+細胞ではcobble stone様コロニー形成が再び可能であった。これら長期培養後の各細胞分画で造血再構成実験を行ったところ、SP細胞では再構成が不可能であったが、Lin^-Scal^+cKit^+CD34^+細胞では現在のところ再構成可能であると判断ている。現在長期再構成能について調べている。このストローマ細胞には造血幹細胞をex vivoで増幅維持する能力があると考えられた。現在このcDNAライブラリーから造血幹細胞の自己複製因子の発現クローニングを行っている

Hematopoietic stem cell の self - renewal (their) factor (membrane proteins) with fixed に の よ の る hematopoietic stem cells ex vivo culture rights amplitude method の establish を refers し て, マ ウ ス hematopoietic stem cell line analytical を い の traits under の point を Ming ら か に し た. (1) Recently, が hematopoietic stem cells であると of <s:1> CD34^+Flk1^+ cells in the bone marrow of Peschleら ら ヒト ヒト report <s:1> た. し か し, マ ウ ス bone marrow に は CD34 + Flk1 ^ ^ + cells は few し か exist せ ず, Hoechst33342 ^ - cells (SP) と は repeat points draw で は な か っ た. マ ウ ス SP cells (Hoechst ^ - Rhodamine ^ - cells) は radiation マ ウ ス で hematopoietic reconstitution が で き た も の の, マ ウ ス CD34 + Flk1 ^ ^ + cells は out な か っ た. Youdaoplaceholder0, ウスで, ウスで, CD34^+, Flk1^+ cells, <s:1> hematopoietic stem cells, で, な, と, と test えられた. (2) マ ウ ス bone marrow Hoechst ^ - Rhodamine ^ - cell (SP) を, あ る ス ト ロ ー マ cells what で ら サ イ ト カ イ ン を add す る こ と な く trained line っ た. そ の results above 6 ヶ に crossing り cobble stone others コ ロ ニ ー を form し な が ら long-term culture of rights す る こ と が may で あ っ た. In the rights of し た cells sets 団 の に は, SP cells も Lin ^ - Scal CD34 + c Kit ^ - ^ + ^ - cell も Lin ^ - Scal ^ + cKit + CD34 + cells も ^ ^ exist が confirm で き た. Youdaoplaceholder0 ウス ウス hematopoietic stem cells <s:1> ex vivo culture が under specific conditions で で may と test えられた. (3) long-term trained し た after 単 from し た SP cells を again び ス ト ロ ー マ cells で trained し て も cobble stone others コ ロ ニ ー は で き な か っ た. し か し after long-term culture の Lin ^ - Scal + CD34 + c Kit ^ - ^ ^ - cell や Lin ^ - Scal ^ + cKit + CD34 + cells で ^ ^ は cobble stone others コ ロ ニ ー may form が again び で あ っ た. こ れ ら の after long-term culture cells each painting で hematopoietic reconstitution be 験 を line っ た と こ ろ, SP cells で は reconstitution が impossible で あ っ た が, Lin ^ - Scal ^ + cKit + CD34 + cells で ^ ^ は now の と こ ろ reconstitution may で あ る と judgment て い る. Now the long-term reconfiguration can be に, に, て, て, べて, る. The ability to maintain the する capacity of <s:1> ストロ ストロ に hematopoietic stem cells をex vivoで growth is があると to test えられた. Now, the <s:1> cDNAラ ラ ブラリ ブラリ ら ら ら hematopoietic stem cell <s:1> self-replication factor <e:1> is present, <s:1> ロ ニ ニ グを グを lines って る る る

项目成果

永田由香,戸所一雄: "血液・腫瘍科「MAPKとアポトーシス」"科学評論社. (2000)

Yuka Nagata、Kazuo Todokoro：“血液学/肿瘤学‘MAPK 和细胞凋亡’” Kagaku Hyoronsha (2000)。

Ueda,H. ら: "Cell-growth control by monomeric antigen : the cell surface expression of lsozyme-specific Ig V-domains fused to truncated Epo receptor."J.Immunol. Methods. 241. 159-170 (2000)

Ueda, H. 等人：“单体抗原的细胞生长控制：与截短的 Epo 受体融合的同酶特异性 Ig V 结构域的细胞表面表达。”J.Immunol。

Ellinger-Ziegelbauer,H.ら: "Ste20-like kinse(SLK),a regulatory kinase for polo-like kinase(Plk)during the G2/M transition in somatic cells."Genes Cells. 5. 491-498 (2000)

Ellinger-Ziegelbauer, H. 等人：“Ste20 样激酶 (SLK)，一​​种体细胞 G2/M 转变期间 polo 样激酶 (Plk) 的调节激酶。”Genes Cells. 5. 491-498 ( 2000）

Sugata,N. ら: "Human CENP-H multimers colocalize with CENP-A and CENP-C at active centromere-kinetochore complexes."Hum.Mol.Genet.. 9. 2919-2926 (2000)

Sugata, N. 等人：“人类 CENP-H 多聚体与 CENP-A 和 CENP-C 在活性着丝粒-动粒复合物上共定位。”Hum.Mol.Genet.. 9. 2919-2926 (2000)

永田由香,戸所一雄: "分子細胞治療「赤血球/巨核球の分化制御シグナル」"先端医学社(印刷中). (2001)

Yuka Nagata、Kazuo Todokoro：“分子细胞疗法“红细胞/巨核细胞分化控制信号””Senshin Igakusha（出版中）。