权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

新規Myc結合蛋白質のがん抑制遺伝子としての機能解析

新型Myc结合蛋白作为抑癌基因的功能分析

基本信息

批准号：
11138262
负责人：
戸所一雄
金额：
$ 2.88万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11138262/
关键词：
EIG mYc

项目摘要

c-Mycがん遺伝子に結合するLeucine Zipperを持つ新規因子Eigを単離し、その生理機能を解析した。1)Myc-Max複合体形成のEigによる阻害を、大腸菌で作成したMyc、Max、Eigを用いてゲルシフトアッセイで解析した。GST-Mycにin vitre transcription-translationでラベルを入れて作成した蛋白質の結合実験も併せて行い、結合が確認できた。2)次に誘導発現した細胞と増殖している細胞からの核抽出液でMyc-Eig、Myc-Max、Max-Max、Mad-Max等の複合体形成とその阻害をIP-westernで調べた。ゲルシフトアッセイも試みた。3)上記の細胞にE-boxを持ったプロモーター遺伝子をレポーターとして導入し転写活性化を調べ、活性が上がることが確認できた。4)他のMyc結合因子 Max、Mizl、Nmi、YY-l、p107、Binl、TBPとの競合性や相乗効果を解析したが、効果は観察されなかった。5)種々の癌細胞でのEigの発現量の減少やEig分子の欠失や変異の有無を解析したが優位な差異は見いだされなかった。6)Eigのリン酸化による複合体形成やtransformationに及ぼす効果を解析した。JNKp38、ERK によってEigがリン酸化された。in vivoで実際にリン酸化されているかどうか^<32>Pラベルした細胞から免疫沈降で調べた。IP-westernにより複合体形成にリン酸化が影響しているかどうか調べた。

c-Myc is a new gene that combines with Leucine Zipper to analyze physiological functions. 1) Analysis of Myc-Max complex formation, inhibition of E. coli formation, and use of Myc, Max, and Eig. GST-Myc is in vitre transcription-translation, and the binding process is confirmed. 2)In addition, Myc-Eig, Myc-Max, Max-Max and Mad-Max complexes were formed in the nuclear extracts of the cells, and IP-western modulation was also detected. You know what? 3)In addition, the E-box of the cell is maintained, and the gene is introduced into the cell to activate the cell. 4)His Myc binding factors Max, Mizl, Nmi, YY-l, p107, Binl, TBP, and the competing effects are analyzed. 5)The reduction of Eig production in cancer cells and the analysis of Eig molecular defects and differences 6)Eig acidification complex formation, transformation and effect analysis JNKp38 and ERK are involved in the production of protein. In vivo<32>, the immune system is regulated by cellular acidification. IP-western complex formation is affected by acidification