中心体複製のメカニズムの解明

阐明中心体复制机制

• 批准号: 12878138
• 负责人: 戸所 一雄
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12878138/
• 关键词: 中心体; Cdk2-Cyclin E

中心体が複製されるにはCdk2-Cyclin Eが活性化されることが必要であることが最近判明したので、本研究では、Cdk2-Cyclin Eによってリン酸化される中心体構成蛋白質である基質を単離同定し、そのシグナル伝達経路と中心体複製の分子メカニズムを解明することを試みた。G1/S期に同調させたヒトHeLa細胞から中心体を精製し、バキュロで産生した活性化Cdk2-Cyclin Eによってリン酸化される中心体蛋白質を2Dゲルから単離し、そのアミノ酸配列を決定した。この時点で米国のグループが全く同じ方法によって同じ蛋白質NPM/B23を単離同定し、その特異的抗体の作成から局在と、中心体複製における機能の重要性をCellに発表した。そこで本研究としては、中心体複製の分子メカニズムの解析を行う為にNPM/B23の詳細な作用機序を現在解析中である。リン酸化部位を変異させた基質蛋白質を用いた解析、抗体による中心体複製への効果を調べている。さらにNPM/B23と相互作用する下流蛋白質を同定するために、pull down実験やtwo hybrid法を用いて単離同定を行っている。

This study was conducted to investigate the molecular mechanism of centrosome replication in Cdk2-Cyclin E. HeLa cells were isolated from centrosome by G1/S phase homology, and their centrosome proteins were purified and activated by Cdk2-Cyclin E. 2D homology and acid alignment were determined. The importance of protein NPM/B23 identity and specific antibody production in the development and replication of centrosomes is demonstrated by the use of the same method. In this study, the molecular mechanism of centrosome replication is analyzed in detail for NPM/B23. The enzyme site is different from the matrix protein, and the antibody is different from the centrosome replication effect. The NPM/B23 interaction results in the simultaneous determination of downstream proteins using the pull-down and two-hybrid methods.

项目成果

Ellinger-Ziegelbauer,H. ら: "Ste20-like kinase (SLK), a regulatory kinase for polo-like kinase(Plk) during the G2/M transition in somatic cells."Genes Cells. 5. 491-498 (2000)

Ellinger-Ziegelbauer, H. 等人：“Ste20 样激酶 (SLK)，一​​种体细胞 G2/M 转变期间 polo 样激酶 (Plk) 的调节激酶。”Genes Cells. 5. 491-498 ( 2000）

Ueda,H. ら: "Cell-growth control by monomeric antigen : the cell surface expression of lsozyme-specific Ig V-domains fused to truncated Epo receptor."J.Immunol. Methods. 241. 159-170 (2000)

Ueda, H. 等人：“单体抗原的细胞生长控制：与截短的 Epo 受体融合的同酶特异性 Ig V 结构域的细胞表面表达。”J.Immunol。

永田由香,戸所一雄: "血液・腫瘍科「MAPKとアポトーシス」"科学評論社. (2000)

Yuka Nagata、Kazuo Todokoro：“血液学/肿瘤学‘MAPK 和细胞凋亡’” Kagaku Hyoronsha (2000)。

Sugata,N. ら: "Human CENP-H multimers colocalize with CENP-A and CENP-C at active centromere-kinetochore complexes."Hum.Mol.Genet.. 9. 2919-2926 (2000)

Sugata, N. 等人：“人类 CENP-H 多聚体与 CENP-A 和 CENP-C 在活性着丝粒-动粒复合物上共定位。”Hum.Mol.Genet.. 9. 2919-2926 (2000)

永田由香,戸所一雄: "分子細胞治療「赤血球/巨核球の分化制御シグナル」"先端医学社(印刷中). (2001)

Yuka Nagata、Kazuo Todokoro：“分子细胞疗法“红细胞/巨核细胞分化控制信号””Senshin Igakusha（出版中）。