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がん関連遺伝子候補としてのインプリント遺伝子の網羅的単離

全面分离印迹基因作为癌症相关候选基因

基本信息

批准号：
12213032
负责人：
伊藤隆司
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12213032/
关键词：
インプリンティング DNAメチル化 CpGアイランド

项目摘要

哺乳類ゲノム中はどちらか一定の親から受け継いだアレルしか発現しないインプリント遺伝子が存在し、発がんにおいてもその役割が注目されている。そこで我々はがん関連遺伝子としてのインプリント遺伝子の網羅的同定を目指して以下の2つのアプローチをとってきた。一つは転写物中の多型cSNPを利用するもので我々が独自に開発したアレリックメッセージディスプレイ法を利用するものである。本法には母性発現遺伝子とミトコンドリア転写物との識別が煩雑という欠点があったが、核移植によって亜種でありながら同一のミトコンドリアを持つマウスを準備しこの問題を克服した。この系統を用いたスクリーニングが進行中で既に20余りの候補cDNAバンドを得て解析を進めている。もう一方はゲノム配列からインプリント遺伝子に特徴的な反復構造を持つCpGアイランドを同定し、近傍遺伝子を候補として解析する戦略である。ヒトゲノムドラフト配列から抽出したCpGアイランドをHerrプロットにかけ縦列反復構造を保持したものを選択、メチル化感受性制限酵素HpaII消化とPCRによる解析を行ったところ、予想外にもこのタイプのアイランドの多くが正常組織中でも完全にメチル化されていた。そこで片側アレルのみがメチル化されたアイランドを効率的に同定する為にメチル化特異的制限酵素McrBCを併用するHpaII-McrBC PCR法を考案した。この方法でImpact遺伝子全域のメチル化をスキャンした結果、プロモータと第1イントロンは母親由来アレルのみがメチル化されるがそれ以外の領域では両アレルともメチル化されることが迅速に示され、本法の有効性が実証された。現在、これを用いたCpGアイランドメチル化の系統的解析に着手した。

Mammal type ゲノム中はどちらかsure の close からReceived け継いだアレルしか発appears しないインプリント伝子がexistent し,発がんにおいてもそのservice cut がAttention されている.そこで我々はがんrelated弝子としてのインプリント缝子のThe same thing as the snare refers to the following の2つのアプローチをとってきた.一つは転物中のmulti-type cSNPをutilizationするもので我々が开発したアレリックメッセージディスプレイ法を utilizing するものである. This method is used to identify the maternal nature of the disease and to identify and transfer it. Plant によって亜 kind でありながら Same のミトコンドリアをhold つマウスをPrepare しこのproblem をovercome した. The system is currently working on the use of artificial intelligence technology, and more than 20 candidate cDNA candidates have been analyzed and analyzed.もう一 Party はゲノム arrangement からインプリント伝子に特徴的な Repeated structure をhold つCpG アイランドを同定し, Nearly close to the remaining 伝子を candidate としてanalytics する戦strategyである.ヒトゲノムドラフト配arrayからdraw out したCpGアイランドをHerrプロThe ットにかけ縦series repetitive structure をmaintenance したものをselect 択, メチルchemically sensitive restricted enzyme HpaII digestion and PCR analysis The タイプのアイランドの多くが is completely にメチル化されていた in the normal tissue. The efficiency of the そこで片 Side アレルのみがメチル化されたアイランドを efficiency is determined as The specific restriction enzyme McrBC is used in combination with HpaII-McrBC The PCR method is a test case.このmethod でImpact legacy 伝子全区のメチル化をスキャンした results, プロモータと 1st イントロンは mother origin アレルのみがメチル化されるがそれでは両アレルともメチルThe effectiveness of this method is proven by the quick and rapid change of the method. Now, I'll start with the analysis of the CpG アイランドメチル化の system.