权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

生きた細胞で代謝調節を視覚化する技術

活细胞代谢调节可视化技术

基本信息

批准号：
18651094
负责人：
伊藤隆司
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

S-adenosylmethionine(SAM)は生体分子への主要なメチル基供与体であり、非常に多くの代謝経路に関与する重要な代謝物である。SAMの動態解析から、代謝調節や細胞周期等の動態をより深く理解するための重要な基礎的知見が得られるど期待されている。食品・醸造産業ではSAMの高生産が重要な課題とされており、その動態解析には応用面からの要望も高い。しかし、SAMは不安定な化合物であり、分析化学的手法による計測が困難である。計測できたとしても細胞の破砕を伴うことから連続的にリアルタイムで計測するまでには至っていない。そこで非破壊的計測が可能なシステムの構築を試みた。SAMセンサー部分としてはSAMをコリプレッサーとする大腸菌のDNA結合蛋白質MetJを利用し、MetJにVP16転写活性化ドメインおよび蛍光蛋白質Venusを連結したセンサーレポーター分子をデザインし、この遺伝子をmetオペレーターの下流に挿入した。細胞内SAM濃度が上昇すると、このセンサーレポーターにSAMが結合し、metオペレーターへの親和性が増大する。その結果、自身をコードする遺伝子の発現を上昇させるというポジティブフィードバックが作用する。このフィードバックの作用はVenusの蛍光強度変化として検出することができる。この蛍光を測定することにより細胞内SAM濃度の動態を追跡できる。この系で、実際に培地中Met濃度変化や代謝経路の変異による細胞内SAMの変化の検出に成功した。

S-adenosylmethionine(SAM) is an important metabolite in many metabolic pathways and is one of the main sources of molecular metabolism in living organisms. A deep understanding of SAM dynamics, metabolic regulation, cell cycle dynamics, etc., is essential for understanding and understanding. Food and beverage industry is an important issue for high production of SAM, and dynamic analysis is an important aspect of SAM. SAMs are unstable compounds, and analytical chemistry methods are difficult to measure. The measurement of the cell cycle is carried out in a continuous manner. This is a non-destructive measurement that can be used to construct a system. The DNA binding protein MetJ of Escherichia coli is used in SAM, and MetJ is used in VP16 to activate the DNA binding protein Venus. Intracellular SAM concentrations increased, SAM binding increased, and met affinity increased. As a result, the occurrence of the virus itself has increased. The effect of this is to change the intensity of Venus 'light. The changes in intracellular SAM concentrations were tracked by light measurement. This system, in real time culture Met concentration changes and metabolic pathway changes, intracellular SAM changes and detection success