選択性の高いタンパク質間相互作用制御化合物の探索技術

高选择性蛋白质-蛋白质相互作用控制化合物的搜索技术

基本信息

批准号：
20651052
负责人：
伊藤隆司
金额：
$ 2.05万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20651052/
关键词：
蛋白質間相互作用阻害剤 2ハイブリッドシステム質量分析

项目摘要

近年注目されているタンパク質間相互作用制御化合物の探索においては,標的相互作用を選択的に阻害して類似相互作用には影響を及ぼさない高い選択性(特異性)の確保が不可欠であり,高選択性を保証するスクリーニング系とin vivoでの選択性を定量的に評価する系が求められている。そこで本研究では,下記の2点につき検討を行った。(1)標的相互作用と対照相互作用を同一細胞でアッセイする独自の並列2ハイブリッド法を用いて,高選択性相互作用制御化合物をスクリーニングする系の構築を目指している。その第一歩として,ペプチドアプタマーのスクリーニングを行ない、昨年度までに,Cdc42に結合してその相互作用を阻害するアプタマーの単離に成功して、この手法の有効性を示した。その成果を踏まえて、今年度は更にスクリーニングを拡大するとともに、得られたペプチドアプタマーの性格付けを進めた。興味深いことにCdc42変異アレル特異的な結合を示すアプタマーも得られており、疾患の原因となる変異アレルの産物のみを阻害するような高特異性相互作用阻害剤単離の可能性が示唆された。(2)定量対象ペプチドを連結した人工タンパク質(Peptide-Concatenated Standard ; PCS)を標準物質とする独自の定量プロテオミクス技術(PCS-MS)を用いて,相互作用制御活性のin vivo評価系を構築することを目指している。そのための基盤として,昨年度に引き続きPCS用ペプチドの選定法に検討を加えて一定の選定法を確立した。実際にこれを用いて各種PCSの設計を進め、それらを階層的に用いる手法の開発にも成功した。

在寻找近年来引起人们注意的化合物时，必须确保有选择地抑制目标相互作用并不会影响类似相互作用的高选择性（特异性），并且需要筛选系统来确保高选择性和在体内选择性进行定量评估的系统。因此，在这项研究中，检查了以下两个点。（1）我们旨在构建一个系统，该系统使用独特的平行两杂种方法筛选高度选择性相互作用的化合物，其中目标和控制相互作用在同一单元格中分析。作为第一步，我们筛选了肽适体，到去年，我们成功地分离了与Cdc42结合并抑制其相互作用的适体，证明了该技术的有效性。考虑到这些结果，今年我们扩大了筛查，并继续表征所获得的肽适体。有趣的是，还获得了表现出特异性结合Cdc42突变等位基因的适体，这表明将仅抑制引起疾病的突变等位基因的产物分离出高特异性相互作用抑制剂的可能性。（2）目的是使用独特的定量蛋白质组学技术（PCS-MS）构建一个体内评估系统，用于使用人工蛋白质（肽偶然标准），将要量化的肽（PC）用作标准物质。为此，我们继续研究选择PC肽的方法，就像去年一样，并建立了某种选择方法。这被用来推进各种PCS的设计，并成功地开发了以层次结构方式使用它们的方法。