アポトーシスにおけるp27^<kip1>の分解制御と細胞死シグナルの相互作用の探究

探索细胞凋亡过程中 p27^<kip1> 降解的调节与细胞死亡信号之间的相互作用

• 批准号: 12215008
• 负责人: 海野 倫明
• 金额: $ 3.01万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12215008/
• 关键词: p27kip1; アポトーシス; Fas; Fas lignd; TFK-1; TUNELアッセイ; アデノウイルス

我々はCDK inhibitorの1つであるp27/kip1を発現したアデノウイルス(以下Adp27)が,各種腫瘍細胞培養株に対してapoptosisを誘導することを報告し,p27/kip1が癌抑制遺伝子類似の機能を有することを提唱してきたが,そのメカニズムは不明のままであった.平成12年度の研究成果として,p27/kip1によるapoptosis誘導のメカニズムの一端をFas/Fas ligand systemの面から解析した.(1)Adp27感染72時間後にTUNEL assayを施行した結果,対象群に対して明らかな右方シフトを示し,Adp27感染によるapoptosis誘導を確認した.(2)Adp27感染前では胆管癌細胞表面にFas発現を認めたがFas ligand発現は認めなかった.一方,p27感染48時間後では明らかなFas ligandの発現を認め,Adp27によるapoptosis誘導にFas pathwayが関与することが示唆された。(3)コントロールとしてp27と同じCDK inhibitorであるp21をアデノウイルスを用いて細胞内に導入し,同様にフローサイトメトリーにてFas ligandの細胞表面への発現を確認したが,Adp21感染後にはFas ligandの発現は全く認められなかった.(4)Fas ligandの中和抗体であるNOK1を添加しTUNEL assayを施行した.Adp27感染後の添加でもapoptosisがほぼ完全に抑制され,p27/kip1によって誘導されるapoptosisがFas/Fas ligand systemを主要経路とすることが確認された.(5)Western blot,RT-PCRでFas ligand発現誘導を確認したが,Adp27感染後もde novoとしてのFas ligandタンパクやFasL mRNA発現量に変化は認められなかった.以上より,p27/kip1によるアポトーシス誘導にFas/Fas ligand systemが深く関与していることが明らかとなった.p27/kip1によるFas ligandの細胞表面の発現はde novo Fas ligandの誘導を伴わず,その局在を細胞内から表面へ変化させることでアポトーシスのトリガーとしている可能性が示唆された。

We use the following Adp27 (Adp27) for CDK inhibitor cell culture and apoptosis cell culture. The p27/kip1 cancer suppressor subtype seems to have the ability to cause a bad response. Please do not know what to do. The results of the research in Pingcheng were reviewed in 12 years, and the p27/kip1 apoptosis instructed the analysis of the Fas/Fas ligand system on one end of the Adp27 infection. (1) the results of TUNEL assay were performed after 72 years of Adp27 infection. Adp27 infection was confirmed by apoptosis. (2) Fas was detected on the cell surface of cholangiocarcinoma before Adp27 infection. Fas ligand was detected. On the other hand, 48 hours after p27 infection, the Fas ligand virus was detected, and Adp27

项目成果

Asano,R.,Katayose,Y. et al: "Functional construction of the anti-mucin core protein (MUCI) antibody MUSEII variable regions in a bacterial expression system"J Biochem (Tokyo). 127(4). 673-9 (2000)

浅野，R.，片寄，Y.

Takemura,S.,Katayose,Y., et al.: "Functional Fv fragment of an antibody specific for CD28: Fv-mediated co-stimulation of T cells"FEBS Lett. 476(3). 266-71 (2000)

Takemura，S.，Katayose，Y.，等：“CD28 特异性抗体的功能性 Fv 片段：Fv 介导的 T 细胞共刺激”FEBS Lett。

Kim,M.,Katayose,Y., et al.: "Adenovirus expressing cyclin dependent kinase inhibitor p27 induces apopotosis for cholangiocarcinoma cell lines through ICE family pathway. Induction of apoptosis in p16INK4A mutant cell lines by adenovirus-mediated overexpre

Kim,M.,Katayose,Y. 等人：“表达细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 p27 的腺病毒通过 ICE 家族途径诱导胆管癌细胞系凋亡。通过腺病毒介导的过度表达诱导 p16INK4A 突变细胞系凋亡

Takemura,S.,Katayose,Y., et al.: "Construction of a diabody (small recombinant bispecific antibody) using a refolding system."Protein Eng.. 13(8). 583-8 (2000)

Takemura,S.,Katayose,Y., 等人：“使用重折叠系统构建双抗体（小型重组双特异性抗体）。”Protein Eng.. 13(8)。

Suzuki,M.,Unno,M.,Katayose,Y. et al.: "Detection of perfusion areas of the gallbladder vein on computed tomography during arterial portography (CTAP)-the background for dual S4a.S5 hepatic subsegmentectomy in advanced gallbladder carcinoma"Hepatogastroent

铃木M.、海野M.、片寄Y.