遺伝子欠損マウスを用いた癌化シグナル伝達におけるMAPキナーゼの機能の解析

利用基因缺陷小鼠分析 MAP 激酶在致癌信号转导中的功能

• 批准号: 12215027
• 负责人: 吉田 進昭
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12215027/
• 关键词: MAPキナーゼ; erk1; erk2; マウス

マウスerk1,erk2遺伝子の全長を含むインサートサイズ30kb以上のゲノムDNAクローンを用いて、それぞれヒト由来翻訳調節配列の下流にレポーター遺伝子を接続したカセットをエクソンに挿入した発現ベクターを構築した。このベクターを培養細胞に導入し、発現ベクターとして機能的であることを確認した上で、実際のターゲティングに使用するのに適当な領域をサブクローニングする手法を試みている。1)erk1遺伝子はマウスゲノムDNAライブラリーのスクリーニングによって単離し、使用した。erk2遺伝子は、マウスの整列化P1ゲノムDNAライブラリーのクローンを購入して使用した。2)ヒトNRF(NF-κ B releasing Factor)の5'UTRはCap構造に依存せず、組織非特異的に機能し、翻訳効率に優れていることが示唆されている。、このヒトNRF5'UTRのknock-inストラテジーにおける利用を目的としてクローニングした。ヒトゲノムDNAを鋳型としたPCR産物をクローニングした。3)ヒトNRF5'UTRの下流に、2個のloxPサイト、ポリAシグナル配列を接続し、loxPサイト間に任意のcDNAを挿入できるカセットを作成した。このカセットを、erk1遺伝子およびerk2遺伝子のエクソンに挿入した。被挿入側のerk1およびerk2遺伝子は、Fosmid、P1のクローンをそれぞれ使用し、カセット挿入位置の異なる数種類のプラスミドを得た。これらのプラスミドのloxPサイト間にレポーター遺伝子のcDNAを挿入したものを作成後、培養細胞に導入した。現在、レポーター遺伝子の発現を元に、knock-inベクターのバックボーンとして最適と考えられるクローンを選択している。

The total length of the erk1, erk2 gene contains more than 30kb of DNA, which is used to regulate the downstream of the sequence. The method of introducing and developing the culture function into the culture cells is to confirm the application of the culture medium in the appropriate field. 1) The erk1 gene can be used in a simple and simple manner. erk2 gene sequence, it's the whole sequence of P1 gene sequence, it's the whole sequence of P1 gene sequence, it's the whole sequence of P1 gene sequence. 2) The 5'UTR of NF-κ B releasing Factor (NF-κ B) is structurally dependent, tissue-specific, functional and translational. The NRF5'UTR's knock-in function is used to detect the presence of the virus. The DNA sequence of the PCR product was analyzed. 3) The downstream of NRF5'UTR, 2 loxP sites, and the sequence of the loxP sites are connected to each other. Any cDNA in between the loxP sites is inserted into the sequence. This is the first time I've ever seen a woman. The erk1 and erk2 vectors on the entry side are used in different ways, such as in different entry positions. The cDNA of the gene was introduced into the cells after preparation and culture. Now, the occurrence of the virus, the knock-in of the virus, and the optimal selection of the virus.

项目成果

Aono,A. et al.: "Forced expression of terminal deoxynucleotidyl transferase in fetal thymus resulted in a decrease in γδT cells and random dissemination of Vγ3Vδ1 T cells in skin of newborn but not adult mice."Immunology. 99. 489-497 (2000)

Aono, A. 等人：“胎儿胸腺中末端脱氧核苷酸转移酶的强制表达导致新生小鼠而非成年小鼠皮肤中 γδT 细胞的减少和 Vγ3Vδ1 T 细胞的随机传播。”免疫学。 2000）

Hirata,A. et al.: "Abnormalities of Synapses and Neurons in the Hippocampus of Neuropsin-Deficient Mice."Mol.Cell.Neuroscience,. (in press).

平田，A.

Matsuoka, T., et al.: "Prostaglandin D2 as a mediator of allergic asthma"Science. 287. 2013-2017 (2000)

Matsuoka, T., et al.：“前列腺素 D2 作为过敏性哮喘的介质”科学。