ジーントラップ法を用いた造血細胞分化関連遺伝子の単離

利用基因捕获法分离造血细胞分化相关基因

• 批准号: 08261221
• 负责人: 吉田 進昭
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Research Institute, Osaka Medical Center for Maternal and Child Health
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08261221/
• 关键词: ジーントラップ; ES細胞; 造血幹細胞; 造血細胞; 増殖因子

ES細胞は、in vivo、in vitroにおいて血球系細胞に分化することが知られている。op/opマウス由来の骨髄繊維芽細胞株OP-9を支持細胞としてES細胞を血球系細胞へと分化させる系が樹立されている。また、コラーゲンをコートしたディッシュ上で培養すると、ES細胞は高率に血球系・血管系の分化マーカーであるflkを発現するようになる。この2つの系を中心にして、ES細胞分化に関連する未知遺伝子の単離を試みた。トラップベクターはEn-2イントロンの下流にスプライシングの受容シグナル、翻訳活性を上げるためのIRESシグナル、およびLacZをマーカー遺伝子として配置、下流にはアクチンプロモーター下にネオマイシン耐性遺伝子を挿入したベクターである。このベクターをES細胞株であるD3およびE14-1細胞に導入して約4000個のES細胞クローンを樹立した。これらのクローンをプールしてOP-9上で培養し、8日目にX-gal染色を行う方法でスクリーニングした。LacZを発現する陽性細胞は非常に少なく同定は困難であったが、陽性と思われる細胞を選別後、cDNAライブラリーを作成し、クローンを同定した。約10種類のcDNAの塩基配列を決定後、未知と思われるものをプローブにして成熟マウスの各組織での発現をノザン法にて解析したが、ある程度の組織特異性はみられるものの、造血系組織で特異的に発現しているクローンは得られなかった。今後、さらなる解析を行うとともに、新規のトラップクローンの樹立を試みる。

ES cells differentiate in vivo and in vitro. OP-9 is a cell line derived from bone marrow cells and ES cells. The high rate of differentiation of blood cell lines and blood vessel lines in ES cells 2. The center of the system, ES cell differentiation, and the separation of unknown genes In addition to the above, the following activities are carried out in the downstream of the plant: IRES, LacZ, etc., and the resistance to the disease is carried out in the downstream of the plant. About 4000 ES cell lines were introduced into D3 and E14-1 cells and established. The culture method for X-gal staining on the OP-9 and the X-gal staining method on the 8th day are described in detail. The expression of LacZ is very difficult to identify. The expression of LacZ is very difficult to identify. The expression of LacZ is difficult to identify. About 10 kinds of cDNA sequences were determined, and the expression of mature cDNA in various tissues was analyzed. The expression of hematopoietic tissue-specific cDNA sequences was determined. In the future, the analysis of the new rules and regulations will be carried out on a trial basis.