ジーントラップ法を用いた造血細胞分化関連遺伝子の単離

利用基因捕获法分离造血细胞分化相关基因

• 批准号: 08261221
• 负责人: 吉田 進昭
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Research Institute, Osaka Medical Center for Maternal and Child Health
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08261221/
• 关键词: ジーントラップ; ES細胞; 造血幹細胞; 造血細胞; 増殖因子

ES細胞は、in vivo、in vitroにおいて血球系細胞に分化することが知られている。op/opマウス由来の骨髄繊維芽細胞株OP-9を支持細胞としてES細胞を血球系細胞へと分化させる系が樹立されている。また、コラーゲンをコートしたディッシュ上で培養すると、ES細胞は高率に血球系・血管系の分化マーカーであるflkを発現するようになる。この2つの系を中心にして、ES細胞分化に関連する未知遺伝子の単離を試みた。トラップベクターはEn-2イントロンの下流にスプライシングの受容シグナル、翻訳活性を上げるためのIRESシグナル、およびLacZをマーカー遺伝子として配置、下流にはアクチンプロモーター下にネオマイシン耐性遺伝子を挿入したベクターである。このベクターをES細胞株であるD3およびE14-1細胞に導入して約4000個のES細胞クローンを樹立した。これらのクローンをプールしてOP-9上で培養し、8日目にX-gal染色を行う方法でスクリーニングした。LacZを発現する陽性細胞は非常に少なく同定は困難であったが、陽性と思われる細胞を選別後、cDNAライブラリーを作成し、クローンを同定した。約10種類のcDNAの塩基配列を決定後、未知と思われるものをプローブにして成熟マウスの各組織での発現をノザン法にて解析したが、ある程度の組織特異性はみられるものの、造血系組織で特異的に発現しているクローンは得られなかった。今後、さらなる解析を行うとともに、新規のトラップクローンの樹立を試みる。

ES cells する, in vivo, in vitroにお にお て て hematopoietic cells に differentiate する る とが know られて る る. Op/op マ ウ ス origin の bone marrow 繊 d bud cell lines op - 9 を support cells と し て ES cells を blood cell へ と differentiation さ せ が る department set up さ れ て い る. ま た, コ ラ ー ゲ ン を コ ー ト し た デ ィ ッ シ ュ nurturing で す る と に は high rate, ES cells, blood is blood vessels is の differentiation マ ー カ ー で あ る FLK を 発 now す る よ う に な る. こ の 2 つ の is を center に し て, differentiation of ES cells に masato even す る unknown legacy 伝 son の 単 from を try み た. ト ラ ッ プ ベ ク タ ー は En - 2 イ ン ト ロ ン の obscene に ス プ ラ イ シ ン グ の by let シ グ ナ ル, turn 訳 activity on を げ る た め の IRES シ グ ナ ル, お よ び LacZ を マ ー カ ー posthumous son 伝 と し て configuration, obscene に は ア ク チ ン プ ロ モ ー タ ー under に ネ オ マ イ シ ン patience heritage 伝 son を scions into し た ベ ク タ ー で あ る. こ の ベ ク タ ー を ES cell lines で あ る D3 お よ び E14-1 cell に import し て about 4000 の ES cells ク ロ ー ン を set し た. こ れ ら の ク ロ ー ン を プ ー ル し て OP - 9 on mesh に で し, 8 X - gal staining method for line を う で ス ク リ ー ニ ン グ し た. LacZ を 発 now す る は very positive cells less に な く difficulty with fixed は で あ っ た が, positive と わ れ る cell を choose after, cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を し, consummate ク ロ ー ン を with fixed し た. About 10 species の cDNA の salt base with column を decided after, unknown と わ れ る も の を プ ロ ー ブ に し て mature マ ウ ス の organizations で の 発 now を ノ ザ ン method に て parsing し た が, あ る degree の tissue specificity は み ら れ る も の の, hematopoietic system organization で specific に 発 now し て い る ク ロ ー ン は must ら れ な か っ た. In the future, さらなる will analyze を lines うとと うとと に に, new regulations <s:1> トラップ ロ ロ ロ <s:1> <s:1> みる establish を test みる.