Oct-3/4と協調して機能する転写因子の同定とES細胞の分化運命決定機構の解析

与Oct-3/4协同作用的转录因子鉴定及ES细胞分化命运决定机制分析

• 批准号: 14028012
• 负责人: 吉田 進昭
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14028012/
• 关键词: ES細胞; Oct-3; 4; 未分化状態; 転写因子; Rex-1

ES細胞の未分化状態維持に必須の転写因子を同定することを目的とし、Rex-1遺伝子の転写調節領域に結合する因子Roxのクローニングを試みた。Rex-1遺伝子は、ES細胞、EC細胞などの未分化細胞特異的に発現し、転写因子Oct-3/4による発現制御を受けることが分かっている。一方でOct-3/4の結合配列のすぐ上流側の配列も転写調節に重要であることが示され、実際その配列上に結合する因子が存在していることも示されたが、その因子の実態は不明であった。Oct-3/4が他の因子と協調して転写活性化因子として機能することから、我々は、上記の配列に結合する因子こそが、Oct-3/4と協調して機能する因子ではないかと考え、その同定を行った。等電点電気泳動とSDS-PAGEとを組み合わせて蛋白の分離を行い、ゲルからペプチドを回収して、活性の再生をこころみた。EMSAによってDNAへの結合能を調べ、目的の配列に特異的に結合するペプチドを同定した。さらにLC-MASを用いてペプチドの内部配列情報を得、このペプチドをコードする遺伝子を同定した。in vitro translationシステムを用いて同定した遺伝子の遺伝子産物を作成したところ、この因子が確かにRex-1遺伝子の転写調節領域内の配列に特異的に結合し、F9細胞だけではなく、ES細胞でも発現していることが確認された。ES細胞の未分化状態維持におけるこの因子の役割をさらに解析するため、ES細胞におけるnull mutantの作製を開始し、Oct-3/4との相互作用、分化状態による修飾の違いなどについても解析を進めている。

ES cell undifferentiated status maintenance must be based on the same writing factor as the target target, and the Rex-1 subsystem must be written in combination with the domain factor, the Rox cluster, and the health test. Rex-1 cell, ES cell, EC cell, undifferentiated cell, Oct-3/4 cell, Oct-3/4 cell, undifferentiated cell and undifferentiated cell. On the other hand, the combination of Oct-3/4 and configuration shows that the upper stream of the configuration shows that it is important to show that it is important, and that the combination of factors on the configuration of the international configuration shows that there is an error, and that the status of the factor is unknown. Oct-3/4 and other factors cooperatively write activating factors. Each of them can be used in combination with other factors and Oct-3/4 cooperation.And we can make the same decision on the same line. Isoelectric point electrophoretic electrophoresis, SDS-PAGE gel electrophoresis, complex protein separation, isoelectric electrophoresis, electrophoretic electrophoresis, isoelectric electrophoresis, isoelectric electrophoresis, electrophoretic electrophoresis, isoelectric electrophoretic electrophoresis, isoelectric electrophoresis. The combination of EMSA information and DNA information can be used to match the specific information of the system. You can get the information from the internal configuration by using the word "LC-MAS". In the in vitro translation system, you can use the same device to make the device, the factor is correct to write the combination of the special device in the field, the F9 cell is used to make sure that the combination is correct, and the ES cell is used to make sure that the combination is correct. ES cell undifferentiated state maintenance factor service cut-off cycle analysis, ES cell cycle start-up, Oct-3/4 interaction, differentiation status modification, response analysis and analysis.

项目成果

Ohtsuka S, Takaki S. Iseki M, Miyoshi K, Nakagata N, Kataoka Y, Yoshida N, Takatsu K, Yoshimura A: "SH2-B is required for both male and female reproduction"Mol Cell Biol. 22. 3066-3077 (2002)

Ohtsuka S、Takaki S. Iseki M、Miyoshi K、Nakagata N、Kataoka Y、Yoshida N、Takatsu K、Yoshimura A：“SH2-B 对于男性和女性生殖都是必需的”Mol Cell Biol。

Nosaka, T., Morita, S., Kitamura, H., Nakajima, H., Shibata, F., Morikawa, Y., Kataoka, Y., Ebihara, Y., Kawashima, T., Itoh, T., Ozaki K., Senba.E., Tsuji, K., Makishima, F., Yoshida, N., Kitamura, T.: "Mammalian Twisted gastrulation is essential for ske

野坂，T.，森田，S.，北村，H.，中岛，H.，柴田，F.，森川，Y.，片冈，Y.，海老原，Y.，川岛，T.，伊藤，T.，

Fukuyama, H., Adachi, M., Suematsu, S., Miwa, K., Suda, T., Yoshida, N., Nagata, S.: "Requirement of Fas expression in B cells for tolerance induction"Eur. J. Immunol.. 32. 223-230 (2002)

Fukuyama, H.、Adachi, M.、Suematsu, S.、Miwa, K.、Suda, T.、Yoshida, N.、Nagata, S.：“B 细胞中 Fas 表达对于耐受诱导的要求”Eur。

Sato, A., Matsumoto, Y., Koide, U., Kataoka, Y., Yoshida, N., Yokota, T., Asashima, M., Nishinakamura, R.: "Zing finger protein sall2 is not essential for embryonic and kidney development"Mol. Cell. Biol.. 23. 62-69 (2003)

Sato, A.、Matsumoto, Y.、Koide, U.、Kataoka, Y.、Yoshida, N.、Yokota, T.、Asashima, M.、Nishinakamura, R.：“Zing Finger 蛋白 sall2 对于胚胎来说不是必需的

Fukuda, T., Yoshida, N., Kataoka, Y., Manabe, R., Mizuno-Horikawa, Y., Sato, M., Kuriyama, K., Yasui, N., Sekiguchi, K.: "Mice lacking the EDB segment of fibronectin develop normally but exhibit reduced cell growth and fibronectin matrix assembly in vitro

Fukuda, T.、Yoshida, N.、Kataoka, Y.、Manabe, R.、Mizuno-Horikawa, Y.、Sato, M.、Kuriyama, K.、Yasui, N.、Sekiguchi, K.：“小鼠缺乏