p53蛋白安定化への基本転写因子TFIIHの関与

碱性转录因子 TFIIH 参与 p53 蛋白稳定

• 批准号: 12215120
• 负责人: 中川 和巳
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12215120/
• 关键词: p53; p38; MAPキナーゼ; MKK6

p53蛋白の安定化にTFIIHを構成するCAKによるp53のセリン33のリン酸化が寄与しているとの予想のもと、まず細胞にダメージを与えた後に免疫沈降したCAKを用いたin vitroキナーゼアッセイを施行した。ダメージの前後でCAKのGST-p53に対するセリン33リン酸化活性の増強は認められなかった。そこでやはりセリン33をリン酸化する事が知られているp38MAPキナーゼに着目し、p38MAPキナーゼ活性化に直接関与するMAPKKであるMKK6のドミナントネガティブ型(Ser207Ala,Thr211Ala)を構成的に発現させた細胞を作成した。この細胞に各種細胞ダメージを与えたところ、セリン33のリン酸化を伴わないp53の蓄積が認められ、1.セリン33のリン酸化はp53安定化には寄与しないこと、また2.in vivoではp38がp53のセリン33をリン酸化する事が明らかになった。これまでp53のセリン33をin vitroでリン酸化するキナーゼとして、CAKの他にもJNK(c-jun kinase)、p38MAPキナーゼが報告されている。今回2種類の細胞株についてp38活性を抑制するMKK6のドミナントネガティブ型を構成的に発現させ、細胞ダメージを与えているが、両者ともp53のセリン33リン酸化は認められなかった。この事はin vivoではp38MAPキナーゼがセリン33をリン酸化しており、CAK・JNKはこのリン酸化には関与していない事を示している。さらにセリン33のリン酸化を伴わないp53が蓄積した状態では通常p53により発現が誘導されるp21/WAF1の発現は認められず、3.セリン33のリン酸化は転写活性化に働き、しかもp21/WAF1の転写活性化に必須であると考えた。この他、α-アマニチンにより直接RNA polymerase IIを阻害した場合にもセリン33のリン酸化、すなわちp38MAPキナーゼの活性化が見られることから、4.転写抑制時にはそのシグナルは転写に関わる複合体よりMAPキナーゼの経路に伝えられ、その活性化に至る事が考えられた。

The stabilization of p53 protein and the formation of TFIIH and the formation of CAK and p53 acidification of p53 protein 33 With しているとのyu want to のもと, まずcell にダメージを and えた后にimmunoprecipitation したCAKを Use いたinキキナーゼアッセイをexecutionした.ダメージの后でCAKのGST-p53に対するセリン33リンacidification activityのincrease strongはcognizeめられなかった.そこでやはりセリン33をリンacidificationする事が知られているp38MA The activity of p38MAP and p38MAP activation are directly related to M APKK's MKK6 のドミナントネガティブ type (Ser207Ala, Thr211Ala) is made of に発成させたcells.このcellに Various cell ダメージを and えたところ, セリン33 のリンacidified をmate わないp53のstore Accumulated recognition of められ、1.セリン33のリンacidificationはp53 stabilization of には Send and しないこと、また2.in vivoではp38がp53のセリン33をリンacidificationする事が明らかになった.これまでp53のセリン33をin vitroでリンacidified するキナーゼとして、CAKの他にもJNK(c-jun kinase), p38MAP キナーゼがreport されている. This time, two types of cell lines are composed of the p38 activity-inhibiting MKK6 MKK6 type. Now it's させ, cell ダメージを and えているが, 両ともp53 のセリン33 リン acidification は recognized められなかった.この事はin vivoではp38MAPキナーゼがセリン33をリンacidificationしており, CAK・JNK はこのリン acidified には关 and していない事を时している.さらにセリン33のリンacidifiedを合わないp53がaccumulationしたstateではusually p53により発appearsがinducedされるp21/WAF1の発appearはcognize められず, 3.セリン33のリンacidification は転WRITE ACTIVATION に働き, しかもp21/WAF1 の転WRITE ACTIVATION に MUST であるとtest えた.このTA、α-アマニチンにより direct RNA polymerase II を hindrance した occasion にもセリン33のリン acidification, すなわちp38MAP キナーゼのactivation が见られることから, 4.転WRITE Inhibition of the time of suppressionナーゼの経路に伝えられ、そのactivationに到事が考えられた.