ATPアナログ認識可能な変異MAPキナーゼを利用したリン酸化基質の探索

使用能够识别 ATP 类似物的突变 MAP 激酶寻找磷酸化底物

• 批准号: 15659016
• 负责人: 仁科 博史
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659016/
• 关键词: リン酸化酵素; ATPアナログ; MAPキナーゼ; ERK; JNK; p38; アポトーシス; Gab2

ERK、SAPK/JNK、p38の3種に大別されるMAPキナーゼシグナル伝達系は、様々な細胞応答に関与する主要なリン酸化酵素である。申請者らは、これらシグナル系の発生や免疫における生理的な役割を明らかにする目的でノックアウトマウスの作出や特異的な阻害剤を用いた解析を行っている。本年度の成果として、発生時の肝形成にはSAPK/JNKの活性化が必須あること,その活性化にはSEK1とMKK7の2種類の活性化因子が協調的に働いている可能性を示した(J.Biol.Chem.278;16595-16601,2003)。また、SEK1とMKK7を欠損しSAPK/JNKの活性化が完全に失われた細胞を作出し、ストレス応答性のアポトーシス誘導に関して検討を加えた。先の報告とは異なりストレス応答性のアポトーシス誘導にはSAPK/JNKの活性化は必須でないことを明らかにした(J.Biol.Chem.279;1621-1626,2004)。さらにFcγ受容体やfMLP受容体による好中球の活性酸素産生において、ERKがアダプター分子のGab2を直接リン酸化すること,その結果PI3キナーゼの活性化が促進されるという興味深い知見を見い出した。ERKの標的分子を見い出すという本研究目的の一つを達成した(J.Immunol.171;4227-4234,2003)。一方、放射標識された非天然型のATPアナログの合成とこれをリン酸化反応の基質として利用可能な点変異MAPキナーゼを作製することによって、変異MAPキナーゼだけが標的分子に放射標識されたγ位のリン酸基を転移できるような実験系では実用化に向けて、高非活性のATPアナログの合成や細胞膜を透過しにくい非天然型ATPアナログを細胞内に導入する条件が検討されている。

ERK, SAPK/JNK and p38 are three major enzymes involved in cellular response. The applicant shall, in accordance with the provisions of this Law, examine and analyze the application of the special protective agent. This year's results show that activation of SAPK/JNK is necessary for liver development, and activation of SEK1 and MKK7 is possible for coordination of activation factors (J. Biol. Chem. 278;16595- 16601, 2003). SEK1 and MKK7 are deficient in activation of SAPK/JNK, and the activation of SAPK/JNK is dependent on the activation of SAPK/JNK. A prior report on the activation of SAPK/JNK was published (J.Biol.Chem.279;1621- 1626, 2004). The Fcγ receptor and the fMLP receptor promote the activation of the PI3 molecule by direct acidification of the Gab2 molecule and ERK. ERK target molecules were identified and identified, and the objective of this study was achieved (J. Immunol. 171;4227- 4234, 2003). The synthesis of a non-natural ATP molecule by a radioactive label, the synthesis of an acid derivative, the synthesis of an acid derivative The conditions for the intracellular introduction of highly inactive ATP molecules through synthetic and cellular membranes are discussed.

项目成果

Nishitai G, Shimizu N, Negishi T, Nishina H, Katada T, et al.: "Stress induces mitochondria-mediated apoptosis independent of SAPK/JNK activation in embryonic stem cells"J.Biol.Chem.. 279. 1621-1626 (2004)

Nishitai G、Shimizu N、Negishi T、Nishina H、Katada T 等人：“应激诱导线粒体介导的细胞凋亡，与胚胎干细胞中 SAPK/JNK 激活无关”J.Biol.Chem.. 279. 1621-1626（

仁科 博史, 渡辺 智美, 大畑 慎也, 浅香 聡, 堅田 利明: "初期肝形成時のシグナル伝達機構"肝胆膵. 46. 295-302 (2003)

Hiroshi Nishina、Tomomi Watanabe、Shinya Ohata、Satoshi Asaka、Toshiaki Katata：“早期肝脏形成过程中的信号转导机制”肝胆胰 46. 295-302 (2003)。

Nishina H, Nakagawa K, Azuma N, Katada T.: "Activation Mechanism and Physiological Roles of Stress-Activated Protein Kinase/c-Jun NH_2-Terminal Kinase in Mammalian Cells"J.Biol.Regul.Homeost.Agents.. (in press). (2003)

Nishina H、Nakakawa K、Azuma N、Katada T.：“哺乳动物细胞中应激激活蛋白激酶/c-Jun NH_2-末端激酶的激活机制和生理作用”J.Biol.Regul.Homeost.Agents..（in

Kishimoto H, Nakagawa K, Watanabe T, Nishina H, Katada T, et al.: "Different properties of SEK1 and MKK7 in dual phosphorylation of stress-induced activated protein kinase SAPK/JNK in embryonic stem cells"J.Biol.Chem.. 278. 16595-16601 (2003)

Kishimoto H、Nakakawa K、Watanabe T、Nishina H、Katada T 等人：“胚胎干细胞中应激诱导的活化蛋白激酶 SAPK/JNK 双重磷酸化中 SEK1 和 MKK7 的不同特性”J.Biol.Chem。

Momose H, Kurosu H, Tsujimoto N, Kontani K, Tsujita K, Nishina H, Katada T.: "dual phosphorylation of PI3-kinase adaptor Gab2 is responsible for O_2-formation synergistically stimulated by Fcgamma and fMLP receptors in differentiated THP-1 cells"J.Immunol

Momose H、Kurosu H、Tsujimoto N、Kontani K、Tsujita K、Nishina H、Katada T.：“PI3 激酶接头 Gab2 的双重磷酸化负责分化 THP-1 细胞中 Fcgamma 和 fMLP 受体协同刺激的 O_2 形成