ATPアナログ認識可能な変異MAPキナーゼを利用したリン酸化基質の探索

使用可识别 ATP 类似物的突变 MAP 激酶寻找磷酸化底物

• 批准号: 13877370
• 负责人: 仁科 博史
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13877370/
• 关键词: リン酸化酵素; ATPアナログ; MAPキナーゼ; ERKJ; JNK; p38; 紫外線; アポトーシス

MAPキナーゼファミリー(ERK, SAPK/JNK, p38)は、様々な細胞応答に関与する主要なリン酸化酵素である。申請者らは最近、紫外線照射時のERKやSAPK/JNK, P38の活性化機構やその生理的役割を検討し、ERKの活性化にはSrcからのEGF受容体の活性化という細胞膜近傍での反応が必要であること、細胞のアポトーシス誘導の関与が示唆されているSAPK/JNKやp38とは対照的にERKは抗アポトーシスに関与することを明らかにした(J. Biol. Chem. 277 ; 366-371, 2002)。しかしながら、これらMAPキナーゼが如何なる標的分子をリン酸化してこのような生理的役割を果たすかについては不明のままである。一般に、細胞内あるいは細胞抽出液内に存在するプロテインキナーゼの標的分子を同定することは困難な場合が多い。この原因の一つは、共存する多数多種類のキナーゼが一斉にリン酸化反応を行い、目的のリン酸化反応を覆い隠してしまうことにある。そこで本研究では、アイソトープラベルされた非天然型のATPアナログの合成とこれをリン酸化反応の基質として利用可能な点変異MAPキナーゼを作製することによって、変異MAPキナーゼだけが標的分子にアイソトープラベルされたγ位のリン酸基を転移できるような実験系の開発を行った。これまでに野生型リン酸化酵素が利用できない非天然型ATPアナログを利用可能な点変異JNKは作製済みであり、同様な方法で、p38やERKの点変異体も作製した。現在これら変異体の特性を検討中である。また、利用可能な変異JNKを用いて肝臓のミトコンドリア画分中の標的分子を探索したところ、分子量約30kDaのタンパク質が特異的にリン酸化されることを見出した。現在このタンパク質の同定が進行中である。

MAP キナーゼファミリー(ERK, SAPK/JNK, p38)は, 様々なcell 濜朜关 and するmain acidifying enzyme である. The applicant's latest age, when exposed to ultraviolet rays, is ERKやSAPK/JNK, The activation mechanism of P38 is the physiological function of activating Src, the activation mechanism of ERK is the activation of EGF receptor, and the cell membrane is close to the cell membrane and the reaction is necessary. Cell's のアポトーシス-induced のrelated and がshow instigation されているSAPK/JNKやp38とは対 Teru's ERK はアポトーシスにSeki and することを明らかにした(J. Biol. Chem. 277; 366-371, 2002). How to acidify the target molecule of しかしながら、これらMAPキナーゼがしてこのようなphysiological labor cut を Fruit たすかについてはUnknown のままである. Generally speaking, there are many situations where it is difficult to determine whether target molecules are present in the cell extract solution or in the cell extract solution.このCauseの一つは、Coexistenceする MANY kinds of のキナーゼが一斉にリン acid The acidification of the acidification of the をを行い, the purpose of the acidification of the い隠してしまうことにある.そこで本 Researchでは、アイソトープラベルされたUnnatural type のATPアナログのSYNTHETIC RESULTS Acidified Reaction Matrix として Utilization Possible Differentiation MAP キナーゼすることによって made by をすることによって, and the molecule にアイソトー of the different MAP キナーゼだけがプラベルされたγpositionのリン acid group を転movable できるような実験system の开発を行った. Utilization of wild-type リン acidifying enzyme and possible use of non-natural ATP アナログをThe difference between JNK and JNK is the same as that of JNK. Now the characteristics of the alien body are different.また、Use the possible な変different JNKをUse the いてgan蓓のミトコンドリアdraw the target molecule をExplore It is a specific にリン acidified されることをした which is a のタンパク substance with a molecular weight of about 30kDa. Now the このタンパク性の同定が is in progress.

项目成果

T.Sasaki, T.Wada, H.Kishimoto, J.Irie-Sasaki, G.Matsumoto, T.Goto, et al.: "The stress kinase MKK7 is a negative regulator of antigen receptor and growth factor receptor induced proliferation in hematopoietic cells"J.Exp.Med.. 17. 757-768 (2001)

T.Sasaki、T.Wada、H.Kishimoto、J.Irie-Sasaki、G.Matsumoto、T.Goto 等人：“应激激酶 MKK7 是抗原受体和生长因子受体诱导的造血细胞增殖的负调节因子

K.Sasito, J.Murai, H.Kajiho, K.Kontani, H.Kurasu, T.Katada: "A novel binding protein composed of hemophilic tetramer exhibits unique properties for the small GTPase Rab5"J. Biol. Chem.. 277(in press). (2002)

K.Sasito、J.Murai、H.Kajiho、K.Kontani、H.Kurasu、T.Katada：“由血友病四聚体组成的新型结合蛋白对小 GTP 酶 Rab5 表现出独特的特性”J。

D.Kitagawa, S.Tanemura, S.Ohata, N.Shimizu, J.Seo, G.Nishitai, et al.: "Activation of extracellular signal-regulated kinase by ultraviolet is mediated through Src-dependent epidermal growth factor receptor phosphorylation : Its implication in an anti-apop

D.Kitakawa、S.Tanemura、S.Ohata、N.Shimizu、J.Seo、G.Nishitai 等人：“紫外线激活细胞外信号调节激酶是通过 Src 依赖性表皮生长因子受体磷酸化介导的：

T.Wada, K.Nakagawa, G.Nishitai, J.Seo, H.Kishimoto, et al.: "Impaired synergistic activation of stress-activated protein kinase SAPK/JNK in ES cells lacking SEK1/MKK4"J.Biol.Chem.. 276. 30892-30897 (2001)

T.Wada、K.Nakakawa、G.Nishitai、J.Seo、H.Kishimoto 等人：“缺乏 SEK1/MKK4 的 ES 细胞中应激激活蛋白激酶 SAPK/JNK 的协同激活受损”J.Biol.Chem

H.Kurosu, T.Katada: "Association of phosphatidylinositol 3-kinase composed of p110β-catalytic and p85-regulatory subunits with the small GTPase Rab5"J.Biochem.. 130. 73-78 (2001)

H.Kurosu, T.Katada：“由 p110β-催化和 p85-调节亚基组成的磷脂酰肌醇 3-激酶与小 GTPase Rab5 的关联”J.Biochem.. 130. 73-78 (2001)