Whole-in-oneシステムによる生命の創成

使用一体化系统创造生命

• 批准号: 12875152
• 负责人: 上田 卓也
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12875152/
• 关键词: 人工細胞; バイオシステム; 蛋白質合成系

大腸菌の蛋白質合成系に関与する可溶性の蛋白性因子(開始因子、伸長因子、終結因子、アミノアシル合成酵素等)の31種類の因子をクローニング、大量発現、精製を行った。さらに、リボソームも極めて純度のものを単離し、また80種類のtRNAを含む画分を調整した。これらの170種類の分子種から再構築することにより、蛋白質合成活性をもった蛋白質合成系(PUREシステム)の作製に成功した。PUREシステムは、1mlあたり0.2mgの蛋白質の生産が可能であった。現在生体外蛋白質合成系または無細胞蛋白質合成系と称されているものは、すべて細胞を破砕した抽出液に過ぎず、真の意味での生体外蛋白質合成系は申請者の本システムがはじめてである。このシステムは、蛋白質分解酵素や核酸分解酵素を含まず、また実験者がその反応を自由に制御できる点で、大変優れた遺伝子発現システムの構築に成功したといえる。このシステムにより、MS2やQβなどのファージを創製することを試みたが、感染能を有するファージを造り出すことはできなかった。同時の並行して、大腸菌の抽出液を用いたシステムでは、感染能を有するファージが生産された。このことから、こうしたファージのアセンブリーには大腸菌由来の蛋白質が関与していることが、示唆された。

Coliform の protein GeChengXi に masato and す る soluble の protein factor (beginning factor, elongation factor, the end factor, ア ミ ノ ア シ ル synthesis enzyme, etc.) の 31 species の factor を ク ロ ー ニ ン グ line, a large number of 発 now, refined を っ た. さ ら に, リ ボ ソ ー ム も extremely め て purity の も の を 単 し, ま た 80 kinds の tRNA を containing む draw points を adjustment し た. こ れ ら の の molecules of different species 170 か ら to construct す る こ と に よ り, protein synthesis activity を も っ GeChengXi た proteins (PURE シ ス テ ム) の cropping に successful し た. PUREシステム あた, 1mlあた あた 0.2mg <s:1> protein <e:1> production が may であった. Now living in vitro protein GeChengXi ま た は cell free protein GeChengXi と said さ れ て い る も の は, す べ て cells を broken 砕 し た extract に too ぎ ず, true の mean で の raw protein in vitro GeChengXi は applicants の this シ ス テ ム が は じ め て で あ る. こ の シ ス テ ム は を や nucleic acid, protein decomposing enzyme decomposition enzyme containing ま ず, ま た be 験 person が そ の anti 応 を free に suppression で き で, large variations る point れ た posthumous son 伝 発 now シ ス テ ム built の に success し た と い え る. こ の シ ス テ ム に よ り, MS2 や Q beta な ど の フ ァ ー ジ を created す る こ と を try み た が, infection can have す を る フ ァ ー ジ を り be created す こ と は で き な か っ た. At the same time, <s:1> parallel て, escherichia coli <s:1> extract を, たシステムで たシステムで, and infectious energy を are used to produce された by するファ ジが ジが ジが ジが. こ の こ と か ら, こ う し た フ ァ ー ジ の ア セ ン ブ リ ー に は coliform origin の protein が masato and し て い る こ と が, sucking さ れ た.

项目成果

Yasukawa, T: "Defect in modification at the anticodon wobble nucleotide of mitochondrial tRNA^<Lys> with the MERRF encephalomyopathy pathogenic mutation"FEBS Letters. 467. 175-178 (2000)

Yasukawa, T：“线粒体 tRNA^<Lys> 的反密码子摆动核苷酸修饰缺陷与 MERRF 脑肌病致病性突变”FEBS Letters。

Yasukawa, T: "A pathogenic point mutation reduces stability of mitochondrial mutant tRNA^<lle>"Nucleic Acids Research. 28. 3779-3784 (2000)

Yasukawa, T：“致病性点突变降低了线粒体突变 tRNA^<lle> 的稳定性”核酸研究。

Tomari, Y: "The role of tightly bound ATP In Escherichia coli tRNA nucleotidyltransferase"Genes to Cells. 5. 689-698 (2000)

Tomari, Y：“紧密结合的 ATP 在大肠杆菌 tRNA 核苷酸转移酶中的作用”基因到细胞。

Yasukawa, T: "Modification Defect at Anticodon Wobble Nucleotide of Mitochondrial tRNAs^<Leu>(UUR) with Pathogenic Mutations of Mitochondrial Myopathy, Encephalopahty, Lactic Acidosis, and Stroke-like Episodes"J. Biol. Chem.. 275. 4251-4257 (2000)

Yasukawa, T：“线粒体 tRNAs^<Leu>(UUR) 反密码子摆动核苷酸的修饰缺陷与线粒体肌病、脑病、乳酸性酸中毒和中风样发作的致病性突变”J。

Yokogawa, T.: "Characterization and tRNA Recognition of Mammalian Mitochondrial Seryl-tRNA Synthetase"J. Biol. Chem.. 275. 19913-19920 (2000)

横河，T.：“哺乳动物线粒体 Seryl-tRNA 合成酶的表征和 tRNA 识别”J。