Notchリガンドを利用した造血幹細胞の増幅とその実用化

Notch配体扩增造血干细胞及其实际应用

• 批准号: 12877156
• 负责人: 平井 久丸
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877156/
• 关键词: Notch; 造血幹細; 造血発生; 1次造血; 2次造血; HES-1; paraaortic splanchnopleures; yalk sac; Notchシグナル; Notchリガンド; GATA-2; 造血幹細胞; ES細胞; 造血幹細胞増幅; 活性化型Notch1; RAS; MAPKシグナル

Notchは細胞の分化を抑制するシグナルを伝達するため、造血幹細胞の未熟性を維持したまま体外で増幅する技術の開発に役立つ可能性がある。本年度は、Notchの造血発生における役割を検討し、Notchシグナルによる造血幹細胞の体外増幅の可能'性を検討することを目的とした。胎生9.5日のNotch1ノックアウトマウスよりparaaortic splanchnopleures(P-Sp)およびyalk sac(YS)を採取し、組織培養による造血細胞の発生、P-SpおよびYS形成細胞によるコロニー形成能と同系マウス造血再構築能を検討した。N1+/-マウスのP-Spより血管内皮細胞は形成されたが、造血細胞は形成されなかった。また、野生型またはN1+/-マウスのYS細胞は、新生児マウスに移植することにより造血を再構築したが、N1+/-マウスのYS細胞は再構築しなかった。しかし、N1+/-マウスYS細胞は、血球コロニー形成能が保たれていた。したがって、Notch1はYSにおける造血前駆細胞の発生(1次造血)には必要でなく、2次造血、特に血管内皮・造血幹細胞共通の前駆細胞が、造血構築能を獲得する過程に必須であると推測された。Notchシグナル分子であるHES-1を、レトロウィルスベクター一によりマウス骨髄造血幹細胞分画(Lin-Scal+c-Kit+CD34-)に導入し、これを放射線照射同系マウスに移植することにより、造血幹細胞が試験管内およびレシピエントマウス個体内でコントールに比べ、より維持されるか否かを検討した。HES-1導入造血幹細胞は試験管内で2日間、および移植されたマウス個体で3ヶ月、コントロール細胞に比較して長く維持され、全ての系統の造血細胞を再構築した。したがって、HES-1シグナルは造血幹綱胞の体外増幅に有崩と考えられた。

Notch has the potential to develop technologies that inhibit differentiation and maintain immature hematopoietic stem cells in vitro. This year, Notch's hematopoietic development process is under discussion, and Notch's hematopoietic stem cell proliferation process is under discussion. Notch1 on the 9.5th day of birth: paraaortic splanchnopleures(P-Sp) and yolk sac(YS) were collected and cultured in tissue culture. Hematopoietic cell development, P-Sp and YS formation were studied. N1+/-P-Sp Vascular endothelial cells are formed, hematopoietic cells are formed. The wild-type N1 +/-YS cells were re-established after transplantation. N1+/-YS cells can be formed into cells. Notch1 YS is a putative process necessary for the development of hematopoietic progenitor cells (primary hematopoiesis), secondary hematopoiesis, especially vascular endothelial cells, hematopoietic progenitor cells, and hematopoietic building function. Notch molecules such as HES-1, C-Kit and CD34-were introduced into the system and maintained in the system. HES-1 introduced into hematopoietic stem cells in vitro 2 days, 3 months after transplantation, compared with the maintenance of hematopoietic cells in the whole system The HES-1 gene was found to be responsible for the proliferation of hematopoietic stem cells in vitro.

项目成果

Izutsu K: "The corepressor CtBP interacts with Evi-1 to repress TGF-β signaling"Blood. 97. 2815-2822 (2001)

Izutsu K：“辅阻遏物 CtBP 与 Evi-1 相互作用，抑制 TGF-β 信号传导”Blood. 97. 2815-2822 (2001)

Shimizu K: "Manic fringe and lunatic fringe modify different sites of the Notch2 extrancellular region, resulting in different signaling modulation"J. Biol. Chem.. 276. 25753-25758 (2001)

Shimizu K：“Manic fringe 和 lunatic fringe 修饰了 Notch2 细胞外区域的不同位点，导致不同的信号调节”J.

Shimizu K: "Binding of Deltal, Jagged1, and Jagged2 to Notch2 rapidly induces cleavage, nuclear translocation and hyperphosphorylation of Notch2."Mol.Cell.Biol.. 20. 6913-6922 (2000)

Shimizu K：“Delta、Jagged1 和 Jagged2 与 Notch2 的结合可快速诱导 Notch2 的裂解、核易位和过度磷酸化。”Mol.Cell.Biol.. 20. 6913-6922 (2000)

Yasukawa M: "HLA class II-restricted antigen presentation of endogenous bcr-abl fusion protein by chronic myelohenous leukemia-derived dendritic cells to CD4+T lymphocytes"Blood. 98. 1498-1505 (2001)

Yasukawa M：“慢性粒细胞白血病衍生树突状细胞将内源性 bcr-abl 融合蛋白 HLA II 类限制性抗原呈递至 CD4 T 淋巴细胞”血液。

Ueno H: "Association of IRS proteins with Bcl-2 and their effects on its phosphorylation and anti-apoptotic function."Mol.Biol.Cell. 11. 735-746 (2000)

Ueno H：“IRS 蛋白与 Bcl-2 的关联及其对其磷酸化和抗凋亡功能的影响。”Mol.Biol.Cell。