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癌遺伝子を用いた実験的ヒト白血病モデルの作製

使用癌基因创建实验性人类白血病模型

基本信息

批准号：
61015015
负责人：
平井久丸
金额：
$ 1.54万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至 1988
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61015015/
关键词：
癌遺伝子トランスフェクション ras遺伝子 cDNA

项目摘要

ヒト癌細肪の高分子DNAをNIH3T3細胞に導入し活性化癌遺伝子を検出する実験系を用いることによって、各種のヒト癌細胞において優性な活性化癌遺伝子が同定・単離されている。この系を用いた場合の活性化癌遺伝子の検出率は10〜20%程度であり、それらの多くはras familyに属する遺伝子である。この検出率を上昇させる目的で、DNAをトランスフェクトしたNIH3T3細胞をヌード・マウスの皮下に接種し、細胞のトランスフォーメーションを腫瘍形成で判定するIn vivo Selection assay法を用いた。その結果、27例中18例で腫瘍形成を認め、うち9例にN-ras遺伝子、1例にK-ras遺伝子の活性化を認めた。この結果から、N-ras遺伝子の活性化はヒト白血病の発症に重要な役割を担うことが予想された。また白血病の前段階にあると考えられているMyelodysplastic Syndrome患者の骨髄細胞DNAを用いてIn vivo selection assay法を試みた結果、18例中10例に腫瘍形成を認め、うち3例にN-ras遺伝子の活性化を認めた。これら3例の活性化N-ras遺伝子を解析した結果、いずれも13番目のアミノ酸コドンの点突然変異が活性化の原因であり、AMLに認められる12番目もしくは61番目のアミノ酸コドンの点突然変異と異なることが明らかになった。これらのN-ras遺伝子のcDNAクローニングを行い、レトロベクターに導入することを試みている。一方、各種のLeukemiaにおいて異常発現の認められた、Src familyに属する癌遺伝子のcDNAクローニングも現在行っている。これらのcDNAを単独あるいは二者同時に造血前駆細胞に導入し、in vitroで白血病モデルを作製することを目的に研究を進行させている。

The expression of activated cancer gene in NIH 3T3 cells was studied by using DNA transfer system. The detection rate of activated cancer gene in this system is 10 ~ 20%. For the purpose of increasing the detection rate, DNA transfer assay was used to determine tumor formation In NIH 3T3 cells inoculated subcutaneously. Among the 27 cases, 18 cases were identified as tumor formation, 9 cases as N-ras gene and 1 case as K-ras gene activation. The results showed that the activation of N-ras gene was important for leukemia development. The DNA of bone cells from patients with Myelodysplastic Syndrome was examined by In vivo selection assay. Tumor formation was identified in 10 of 18 cases, and activation of N-ras gene was identified in 3 cases. The analysis results of activated N-ras gene in 3 cases showed that there were 13 cases of sudden changes in the activation of N-ras gene, 12 cases of AML gene, and 61 cases of sudden changes in the activation of N-ras gene. The N-ras gene cDNA library was designed to be used as a template for the introduction of N-ras genes. A party, a variety of Leukemia in the abnormal occurrence of recognition, Src family members of the cancer gene cDNA library now in operation This cDNA is introduced into hematopoietic progenitor cells in vitro and studied for this purpose.