权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

遺伝子破壊法を用いた高等真核細胞特有のクロマチン会合機構とその構造変化に基づく細胞機能制御の研究

利用基因破坏方法研究高等真核细胞特有的染色质组装机制以及基于其结构变化的细胞功能控制

基本信息

批准号：
01F00347
负责人：
中山建男
金额：
$ 1.02万
依托单位：
宮崎医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

酵母の転写コリプレッサーHir1p,Hir2pのほ乳類ホモログHIRAはクロマチンのアセンブリーにおいて、重要な役割を担っていることが示唆されながら、高等真核細胞での機能に関しては不明な点が多い。本研究では、ニワトリDT40細胞株で分子生物学的手法やジーンノックアウト法などを駆使して、以下の結果を得た。1、ニワトリHIRAのcDNA,genomic DNAをクローニングした。ニワトリHIRAは1019個のアミノ酸からなり、ヒトHIRAと約90%のホモロジーを有していた。さらに、そのN-末端領域にWDリピートモチーフ、C-末端領域にLXXLLモチーフを持っていた。2、HIRAはそのWDモチーフを介してクロマチンアセンブリーファクター(CAF-1)のp48サブユニットと結合し、LXXLLモチーフを介してヒストンデアセチラーゼHDAC-2と相互作用することを明らかにした。3、ルシフェラーゼアッセイでHIRAは転写抑制作用を有すること、この機能発現にはWDモチーフとLXXLLモチーフがそれぞれ必須であることを明らかにした。4、genomic DNAを基に作成した2つのターゲッティングベクターで、ジーンノックアウト法を行い、HIRAホモ欠損変異株を作成した。5、本変異株は増殖速度が低下し、HIRAのcDNAを導入することによって増殖能が回復した。さらに、この機能はHIRAのN-末端領域のWDリピートモチーフに基づくことを明らかにした。

Yeast's DNA is highly sensitive to hir1 p, hir2 p and hir2 p, and hir4 is highly sensitive to hir1 p, hir2 p and hir2, and hir2 is highly sensitive to hir1 p, hir2 p and hir2. In this study, the following results were obtained from the molecular biology of DT40 cell line. 1、ニワトリHIRAのcDNA,genomic DNAをクローニングした。HIRA has 1019 active sites and 90% active sites. N-terminal domain WD, C-terminal domain LXXLL 2. HIRA provides a clear explanation of the interaction between HDAC-2 and WD-1, and LXXLL-1 and CAF-1. 3. HIRA has the function of writing inhibition, and the function of writing inhibition has the function of writing inhibition. 4. Genomic DNA gene base preparation 2. Genomic DNA gene base preparation 2. Genomic DNA gene base preparation 3. Genomic DNA gene base preparation 3. Genomic DNA gene base preparation 4. Genomic DNA gene base preparation 3. Genomic DNA gene base preparation 4. Genomic DNA gene base preparation 5. Genomic DNA gene base preparation 4. Genomic DNA gene base preparation 4. 5. The growth rate of the mutant plants was low, and the growth rate of the HIRA cDNA was restored. The function of this function is to divide the N-terminal field of HIRA into two parts.