約半数のヒストン遺伝子を欠失したニワトリDT40変異株の解析

约一半组蛋白基因缺失的鸡 DT40 突变株分析

• 批准号: 08680659
• 负责人: 中山 建男
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: 宮崎医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680659/
• 关键词: ヒストン; ジーンノックアウト法; 遺伝子発現; 自己補償機構; 2次元電気泳動

合計44コピーのニワトリヒストン遺伝子の中、39コピーは約110kbのクラスター内に存在し、また、H1,H2A,H2B,H3には、それぞれ6種、3種、4種、2種のバリアントが存在する。ジーンノックアウト法を用いて、ニワトリBリンパ細胞株DT40で21コピーを含む約57kbの領域を欠失した変異株(Δ57kb)を作製した。4種のH1バリアント、2種のH2Bバリアントを同時に欠失しているこの変異株を解析し、以下のような結果を得た。1、H1遺伝子群の特定メンバーに特異的なアンチセンスRNAプローブを用いたRNase protection assayで、野生株および変異株における、その転写産物と残りのメンバー転写産物量を測定し、自己補償機構の存在を明らかにした。2、H2A,H2B,H3,H4遺伝子群に関しても、それぞれ、特定のメンバーのアンチセンスRNAプローブを用意し、野生株、変異株における残りの遺伝子の転写産物量を定量した結果、H2A,H2B,H3,H4全てのコアヒストン遺伝子群でも自己補償機構が作動することを明らかに出来た。3、Actinomycin D存在下で同様に解析した結果、ヒストンmRNAの安定性に変化は認められなかった。4、ヒストン画分を得、SDS-PAGEおよびacid-urea-PAGEで分析、定量した結果、蛋白質レベルでも、各ヒストンサブタイプが化学量論的に一定に保たれていることが明らかに出来た。5、約半分のヒストン遺伝子数が欠失しても、増殖速度に変化は認められなかった。6、この欠失変異株の2D-PAGEでの蛋白質パターンが野生株のそれと異なることから、各ヒストンバリアントは特定遺伝子の発現制御に係わっていることが示唆された。

There are 6, 3, 4, and 2 species of H1, H2A, H2B, and H3 in a total of 44, 39, and approximately 110kb of H1, H2A, H2B, and H3. The cell line DT40 contains about 57kb of DNA and the mutant strain (Δ57kb) is controlled by the method of DNA extraction. 4 species of H1 and 2 species of H2B were analyzed simultaneously, and the following results were obtained. 1. The specific RNA profile of H1 gene subgroup was determined by RNase protection assay, wild strain and mutant strain, and the amount of DNA product was determined. The existence of its own compensation mechanism was also determined. 2. The quantitative results of RNA expression products of H2A, H2B, H3, H4 gene groups, H 3. In the presence of Actinomycin D, the same analysis results and the stability of mRNA were observed. 4, SDS-PAGE and acid-urea-PAGE analysis, quantitative analysis, protein analysis, chemical analysis, quantitative analysis 5. About half of the number of seeds is lost, and the growth speed is changed. 6. The 2D-PAGE of these mutant strains showed that the protein of each mutant strain was different from that of the wild strain, and that the protein of each mutant strain was different from that of the wild strain.

项目成果

Takami et al.: "Organization of the chicken histone genes in a major gene cluster and generation of an almost complete set of the core histone protein sequences" DNA Res.3. 95-99 (1996)

Takami 等人：“鸡组蛋白基因在主要基因簇中的组织和几乎完整的核心组蛋白序列集的生成”DNA Res.3。

Takami et al.: "An approximately half set of histone genes is enough for cell proliferation and a lack of several histone variants causes protein pattern changes in the DT40 chicken B cell line" J.Mol.Biol.265. 394-408 (1997)

Takami 等人：“大约一半的组蛋白基因足以进行细胞增殖，并且缺乏几种组蛋白变体会导致 DT40 鸡 B 细胞系中蛋白质模式的变化”J.Mol.Biol.265。