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サイロキシン結合蛋白質との親和性を利用するPCB特異的アッセイ系

利用与甲状腺素结合蛋白的亲和力的 PCB 特异性检测系统

基本信息

批准号：
13027206
负责人：
仲井邦彦
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ポリ塩化ビフェニール(PCB)による内分泌撹乱作用の1つの機序として甲状腺ホルモン撹乱作用が疑われ、特に甲状腺ホルモン(サイロキシン)の脳移行に必須なトランスサイレチンにPCBが結合し、その脳移行を部分的に抑制する作用が想定されている。そのようなPCBには、従来毒性が低いと考えられてきた非コプラナーPCBやその水酸化物が候補として指摘されている。本研究ではそのようなPCBの生物活性を分析、定量することを目的に、PCBとトランスサイレチンとの親和性を利用して分析するアッセイ系の構築を目指した。具体的には、BIACORE2000を用い、センサーチップへサイロキシンを固相化し、トランスサイレチンの結合を確認。そこにトランスサイレチンと親和性を有するPCBが加わった場合、PCBがトランスサイレチンに結合し固相化サイロキシンからトランスサイレチンを解離させることを利用し分析するアッセイ系を考案した。センサーチップへのサイロキシン固相化はアミノカップリング法により実施し、トランスサイレチンの結合も弱いながら確認された。しかしながら、トランスサイレチン結合の十分なシグナルを得ることは出来ず、アッセイ系の完成には到らなかった。この原因としてサイロキシン固相化の際にトランスサイレチン結合部位がアミノカップリングにより修飾され、トランスサイレチンと相互作用できなくなっていることが強く示唆された。実際に、PCBをアッセイ系に添加してもシグナルを確認することはできなかった。改良研究として、サイロキシン固相化の検討が必要であり、スペーサーアーム導入などが有力と考えられた。

ポリ塩化ビフェニール(PCB)によるEndocrine disrupting actionの1つのMechanism sequenceとしてThyroid stimulating actionがsuspectわれ、Special thyroid stimulating action (サイロキシン)の脳动にRequiredなトランスサイレチンにPCB The binding and migration of parts of the に inhibits the する effect and the されている is assumed. PCB PCB, low toxicity testプラナーPCB やその水 academic acid compound がとして finger されている. The purpose of this study is to analyze and quantify the biological activity of PCB, PCBトランスサイレチンとのcompatibility を Utilization して Analysis するアッセイ System のConstruction をObject Refers した. Specifically, には, BIACORE2000 を use い, センサーチップへサイロキシンを solid phase し, トランスサイレチンのcombination を confirmation.そこにトランスサイレチンとcompatibilityを有するPCBがplusわった occasion, PCBがトランスサイレチンにcombination Solid-phase solid phase dissociationさせることをutilizationしanalyzeするアッセイ Department of examination caseした. Solid phase solidification methodより実士し、トランスサイレチンの合も weak いながらConfirmationされた.しかしながら、トランスサイレチンcombinationの十なシグナルを got the ることは came out ず, アッセイ组のcompleted the には to らなかった.このCause としてサイロキシンsolidification の九にトランスサイレチンJointing part がアミノカップリングにより Modify され, トランスサイレチンとinteraction できなくなっていることがstrong く Show instruct された.実记に、PCBをアッセイ式にaddedしてもシグナルをconfirmationすることはできなかった. Improvement research として, サイロキシン solid phase の検question がnecessary であり, スペーサーアーム import などが力と考えられた.