環境ホルモン固定化高性能ビーズを用いた生体側レセプターの単離同定とその機能解析

内分泌干​​扰物固定化高性能微珠的生物受体分离鉴定及其功能分析

• 批准号: 13027224
• 负责人: 片岡 浩介
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13027224/
• 关键词: 内分泌攪乱物質; アフィニティー精製; ラテックス微粒子

内分泌攪乱物質(Endocrine Disruptors : EDs)は、生体にさまざまな悪影響を与える以上は、生体側のレセプター分子が存在するはずである。内分泌系の攪乱作用という観点からすれば、最も考えやすいレセプター候補となるのは核内レセプター群であるが、これまでに調べられた限りでは、これらのレセプター群との結合は、疑似エストロゲン作用があるとされている物質ですら、必ずしも充分強いものではない。また、EDsは内分泌系の攪乱作用以外にもさまざまな悪影響を生体に与えることが知られている。したがって本研究では、EDsの生体側のレセプターが他に存在するものと考え、これらを単離・同定し、EDsの生体に及ぼす影響とそのメカニズムについて新たな視点を獲得することが目的である。生体側レセプター分子を精製するために、高性能のラテックス徴粒子を担体としたアフィニティー精製法を用いた。フタル酸エステル、アルキルフェノール、アトラジンなどをモデル化合物として選び、これらをラテックス微粒子表面上に固定化し、細胞の粗抽出液からこれらのEDsに特異的に結合する生体側レセプター分子を精製したところ、それぞれのEDsに対して特異的に結合する因子が複数種類ずつ得られることがわかった。これらのおのおのを大量に精製して部分アミノ酸配列を決定することにより、タンパク質を同定した。また、複数のEDs固定化微粒子から共通して精製されるタンパク質もあれば、それぞれのEDにのみ特異的に結合するタンパク質もあることがわかった。これらのEDsに共通して得られるタンパク質は、EDsに共通した攪乱作用を発揮する上でのレセプター分子として機能している可能性が考えられる。一方、それぞれのEDに特異的に結合するタンパク質は、それぞれのEDに固有の作用に関与しているのかもしれない。現在、これらのタンパク質に対応するcDNAを入手し、分子生物学的手法を用いてこれらのタンパク質の機能と、EDsによる攪乱作用との関連を解析している。

Endocrine disrupting substances (Endocrine Disruptors, EDs) は, living body に さ ま ざ ま な 悪 influence を and え る は above, gave birth to the body side の レ セ プ タ が ー molecules exist す る は ず で あ る. Endocrine department の disrupting と い う 観 point か ら す れ ば, most も exam え や す い レ セ プ タ ー alternate と な る の は intranuclear レ セ プ タ ー group で あ る が, こ れ ま で に adjustable べ ら れ た limit り で は, こ れ ら の レ セ プ タ ー group と の は, suspected エ ス ト ロ ゲ ン role が あ る と さ れ て い る material で す ら shall ず し も sufficiently strong い も の で は Youdaoplaceholder0 な. Endocrine is の disrupting ま た, EDs は outside に も さ ま ざ ま な 悪 influence を raw body に and え る こ と が know ら れ て い る. し た が っ て in this study で は, EDs の raw body side の レ セ プ タ ー が he に す る も の と え test, こ れ ら を 単 leaves, with し, EDs の raw に and ぼ す influence と そ の メ カ ニ ズ ム に つ い て new た な viewpoints を get す る こ と が purpose で あ る. Born body side レ セ プ タ ー molecular を refined す る た め に, high-performance の ラ テ ッ ク ス 徴 particle を supporter と し た ア フ ィ ニ テ ィ を ー refining method using い た. フ タ ル acid エ ス テ ル, ア ル キ ル フ ェ ノ ー ル, ア ト ラ ジ ン な ど を モ デ ル compound と し て び, こ れ ら を ラ テ ッ ク ス particles し に immobilized on the surface, cell の crude extract か ら こ れ ら の EDs に specific に combining す る raw body side レ セ プ タ ー molecular を refined し た と こ ろ, そ れ ぞ れ の EDs に し seaborne て specific に Combining the する factor が complex number types ず, we get られる とがわ とがわ った った った. こ れ ら の お の お の を large に refined し て part ア ミ ノ acid with column を decided す る こ と に よ り, タ ン パ ク qualitative を be し た. ま た, plural の EDs immobilized particles か ら common し て refined さ れ る タ ン パ ク qualitative も あ れ ば, そ れ ぞ れ の ED に の み specific に combining す る タ ン パ ク qualitative も あ る こ と が わ か っ た. Common こ れ ら の EDs に し て have ら れ る タ ン パ ク は, EDs に common し た scrambling effect を 発 swing す る on で の レ セ プ タ ー molecular と し て function し て い る possibility が exam え ら れ る. One party, そ れ ぞ れ の ED に specific に combining す る タ ン パ ク は, そ れ ぞ れ の ED に inherent の role に masato and し て い る の か も し れ な い. Now, こ れ ら の タ ン パ ク qualitative に 応 seaborne す る cDNA of を し, molecular biology methods を using い て こ れ ら の タ ン パ ク の function と, EDs に よ る scrambling effect と の masato even を parsing し て い る.

项目成果

K.Kataoka et al.: "A set of Hox proteins interact with the Maf oncoprotein to inhibit its DNA binding, transactivation, and transforming activities."J. Biol. Chem.. 276. 819-826 (2001)

K.Kataoka 等人：“一组 Hox 蛋白与 Maf 癌蛋白相互作用，抑制其 DNA 结合、反式激活和转化活性。”J.

K.Kataoka et al.: "Induction of cellular auti-oxidative stress genes through heterodimeric transcription factor Nrf2/Small Maf by anti-rheumatic gold(I) compounds"J.Biol.Chem.. 276. 34074-34081 (2001)

K.Kataoka 等：“抗风湿金 (I) 化合物通过异二聚体转录因子 Nrf2/Small Maf 诱导细胞自氧化应激基因”J.Biol.Chem.. 276. 34074-34081 (2001)

Y.Omori et al.: "CREB-H : a novel mammalian transcription factor belonging to the CREB/ATF family and functioning via the box-B element with a liver-specific expression."Nucleic Acids Res.. 29. 2154-2162 (2001)

Y.Omori 等人：“CREB-H：一种属于 CREB/ATF 家族的新型哺乳动物转录因子，通过具有肝脏特异性表达的 box-B 元件发挥作用。”Nucleic Acids Res.. 29. 2154-2162

K.Shiba et al.: "Cloning of the hamster androgen receptor gene"J.Dermatol.Sci.. 26. 163-168 (2001)

K.Shiba等：“仓鼠雄激素受体基因的克隆”J.Dermatol.Sci..26.163-168(2001)

K.Kataoka et al.: "Maf and Jun nuclear oncoproteins share downstream target genes for inducing cell transformation."J. Biol. Chem.. 276. 36849-36856 (2001)

K.Kataoka 等人：“Maf 和 Jun 核癌蛋白共享诱导细胞转化的下游靶基因。”J.