環境ホルモン固定化高性能ビーズを用いた生体側レセプターの単離同定とその機能解析

内分泌干扰物固定化高性能微珠的生物受体分离鉴定及其功能分析

基本信息

批准号：
13027224
负责人：
片岡浩介
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13027224/
关键词：
内分泌攪乱物質アフィニティー精製ラテックス微粒子

项目摘要

内分泌攪乱物質(Endocrine Disruptors : EDs)は、生体にさまざまな悪影響を与える以上は、生体側のレセプター分子が存在するはずである。内分泌系の攪乱作用という観点からすれば、最も考えやすいレセプター候補となるのは核内レセプター群であるが、これまでに調べられた限りでは、これらのレセプター群との結合は、疑似エストロゲン作用があるとされている物質ですら、必ずしも充分強いものではない。また、EDsは内分泌系の攪乱作用以外にもさまざまな悪影響を生体に与えることが知られている。したがって本研究では、EDsの生体側のレセプターが他に存在するものと考え、これらを単離・同定し、EDsの生体に及ぼす影響とそのメカニズムについて新たな視点を獲得することが目的である。生体側レセプター分子を精製するために、高性能のラテックス徴粒子を担体としたアフィニティー精製法を用いた。フタル酸エステル、アルキルフェノール、アトラジンなどをモデル化合物として選び、これらをラテックス微粒子表面上に固定化し、細胞の粗抽出液からこれらのEDsに特異的に結合する生体側レセプター分子を精製したところ、それぞれのEDsに対して特異的に結合する因子が複数種類ずつ得られることがわかった。これらのおのおのを大量に精製して部分アミノ酸配列を決定することにより、タンパク質を同定した。また、複数のEDs固定化微粒子から共通して精製されるタンパク質もあれば、それぞれのEDにのみ特異的に結合するタンパク質もあることがわかった。これらのEDsに共通して得られるタンパク質は、EDsに共通した攪乱作用を発揮する上でのレセプター分子として機能している可能性が考えられる。一方、それぞれのEDに特異的に結合するタンパク質は、それぞれのEDに固有の作用に関与しているのかもしれない。現在、これらのタンパク質に対応するcDNAを入手し、分子生物学的手法を用いてこれらのタンパク質の機能と、EDsによる攪乱作用との関連を解析している。

由于内分泌破坏者（EDS）对生物体有各种不利影响，因此在生物侧应该有受体分子。从内分泌系统的扰动效应的角度来看，最可能的候选受体是核受体基团，但就我们所研究的而言，甚至据说具有伪源性效应的物质，也不一定与这些受体组有足够的强大结合。除了内分泌系统的扰动外，还已知ED还会对生物体造成各种不利影响。因此，在这项研究中，目的是假设ED的生活方面还有其他受体，并隔离和识别它们，并就ED对生物生物体及其机制的影响有了新的观点。为了纯化生物体受体分子，使用高性能乳胶粒子作为载体使用亲和力纯化方法。邻苯二甲酸酯，烷基苯酚，阿术等被选为模型化合物，它们被固定在乳胶微粒的表面上，并且特异性结合这些EDS的生物体受体分子是从粗细胞提取物中纯化的，并且发现多种类型的因素与每个EDS特定结合。通过对每一个的质量纯化来鉴定蛋白质，以确定部分氨基酸序列。还发现某些蛋白通常是从固定的多个EDS纯化的，而另一些蛋白质仅与每种ED有特定结合。人们认为，在这些ED中通常获得的蛋白质可以用作受体分子，从而在发挥ED的常见扰动作用时。另一方面，专门结合到每个ED的蛋白质可能与每个ED的独特作用有关。当前，获得了与这些蛋白质相对应的cDNA，并使用分子生物学技术来分析这些蛋白质功能与EDS的扰动效应之间的关系。