細胞の増殖停止機構を反映して発現の変化する細胞表面抗原MM3の転写制御機構の解析

细胞表面抗原MM3转录调控机制分析，其表达变化反映细胞生长停滞机制

基本信息

批准号：
07680761
负责人：
片岡浩介
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07680761/
关键词：
転写制御細胞周期細胞表面抗原

项目摘要

モノクローナル抗体25Abによって認識される細胞表面抗原MM3は、通常の繊維芽細胞においては低い発現しか見られないが、細胞を血清飢餓状態において増殖を停止させた場合にはその発現が誘導されるのに対して、接触阻止による増殖停止時には完全に抑制される。その発現制御の機構を解明することで増殖停止に至る異なる経路を分子レベルであきらかにするのが本研究の目標である。このような発現の変化が主に転写のレベルで行われていることをこれまでにあきらかにしてきたので、当該年度においてはこの遺伝子のプロモーター領域を単離してその転写活性について検討した。まず転写開始部位を決定し、これより上流1.2kbについて塩基配列を決定したところ典型的なTATA-box、CAAT-box、GC-boxなどを持つことが分かった。さらに得られたプロモーター領域5.6kb中から、上記のような発現の変化を司る領域をluciferase assayによって検索したが、そのような領域は見い出せなかった。転写開始部位より上流160bp程度のみで5.6kb断片と同程度の転写活性を有すること、またMM3を全く発現しない細胞株においても高い活性を持つことから、ここで得られたプロモーター領域以外に転写を抑制する領域(サイレンサー)が存在するのではないかと推測された。さらに、MM3はSV40ウイルスによって癌化した細胞においてその発現が転写レベルで著しく上昇することを見い出したが、得られたプロモーターの活性はこの発現の変化とも対応しなかった。この点でもこの領域外にサイレンサーの存在が強く示唆された。血清飢餓すなわち増殖の正のシグナルの枯渇によって発現の抑制が解除されるような機構はこれまでに知られていない。そこで現在、すでに得られているexonを含む下流領域からの検索を進め、またさらに上流領域を含むゲノムクローンの単離を試みている。

单克隆抗体25AB识别的细胞表面抗原MM3在正常成纤维细胞中的表达仅较低，但是当细胞在血清饥饿中停止生长时，它们的表达会被诱导，而当它们被接触抑制在增殖时完全抑制。这项研究的目的是阐明表达控制的机制，并揭示导致分子水平生长停滞的不同途径。迄今为止已经明确表明这种表达变化主要在转录水平上进行，因此在今年，该基因的启动子区域被分离并检查其转录活性。首先，确定了转录启动位点，并确定了其上游1.2 kb的基础序列，发现它具有典型的tata-box，caat-box，gc-box等。此外，从5.6 kb启动子启动子区域中搜索了搜索上述表达变化的区域，但没有找到露素酶的区域，但没有找到。由于它具有类似于转录起始位点上游约160 bp的5.6 kb片段的转录活性，并且在根本不表达MM3的细胞系中也具有很高的活性，因此可能会有一个区域（Silencer）除了在此处获得的启动子区域抑制转录外（Silencer）。此外，我们发现在转录水平下，MM3的表达显着增加，而Sv40病毒癌细胞的细胞表达，但所得启动子的活性与这种表达变化不符。这也强烈建议在该地区以外存在消音器。迄今为止，还没有知道血清饥饿或增生阳性信号的耗尽以抑制表达的机制。因此，我们目前正在从包含已经获得的外显子的下游区域进行搜索，并试图隔离包含上游区域的基因组克隆。