Molecular mechanism underlying secondary hyperparathyroidism in chronic kidney disease

慢性肾脏病继发性甲状旁腺功能亢进的分子机制

• 批准号: 21K08561
• 负责人: 片岡 浩介
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08561/
• 关键词: 副甲状腺; 転写調節; リン・カルシウム代謝

PTH遺伝子発現のビタミンDおよびFGF23による抑制の分子機構の解明を目指した。従来までに、線維芽細胞BHK21を用いて、PTH遺伝子エンハンサー・プロモーターを含むレポーターと、副甲状腺特異的な転写活性化因子Gata3-MafB-Gcm2、さらにビタミンD受容体VDRとそのパートナーRXRaを共発現させることによって、ビタミンDの濃度依存的に転写が抑制される実験系を構築していた。本実験系においては、多数の因子を同時に発現させなければならないので、導入した転写因子の発現量や挙動を調べる上で、それらの検出に問題があった。そこで、転写をドライヴするプロモーターの最適化、IRESを利用した多因子の同時発現、検出におけるタグの最適化（PTH転写調節とビタミンDによる抑制へ干渉しないことの確認）などを行った。これらの改良の結果、ビタミンD依存的な転写因子の挙動の変化を容易に観察できるようになった。また、この系を発展させて、FGF受容体FGFR1とその共受容体Klothoを共発現させることにより、培地に組換えFGF23タンパク質を添加することによって、PTH遺伝子の発現抑制をモニターできる系の構築を試みた。現在までのところ、おおむね成功したように見えているが、FGFR1のキナーゼ活性の依存性や、Klothoの必要性、添加するFGF23の濃度依存性などを検証中である。一方、副甲状腺機能抑制系の受容体のひとつであるKlothoの発現調節機構について、ゲノム配列の保存性を利用して、ヒトKlotho遺伝子の転写開始点近傍から上流約2.5 kbの範囲をクローニングし、レポータープラスミドを作成した。Gata3, MafB-Gcm2に加え、さらに関与する可能性のある転写因子の候補としてTbx1, Six1, Pax1, Eya1の発現プラスミドを構築し、転写活性を調べた。

The 伝 offspring of PTH are found to be ビタ, <s:1>, <s:1>, Dおよび, FGF23による, which inhibits <s:1>. The molecular structure of <s:1> is explained by を. The target finger is た. 従 to ま で に, line D bud cells BHK21 を with い て, PTH but 伝 エ ン ハ ン サ ー · プ ロ モ ー タ ー を containing む レ ポ ー タ ー と, vice thyroid specific な planning write activation factor Gata3 MafB - Gcm2, さ ら に ビ タ ミ ン D by the system, let the body VDR と そ の パ ー ト ナ ー RXRa を 発 now total さ せ る こ と に よ っ て Youdaoplaceholder0, ビタ, <s:1> D <s:1> concentration-dependent に転 writing が inhibition される experimental system を construction て て た た. This be 験 department に お い て は, most の factor を に 発 now さ せ な け れ ば な ら な い の で, import し た planning write factor の 発 now quantity や 挙 motion を べ る で, そ れ ら の 検 に problem が あ っ た. そ こ で, planning to write を ド ラ イ ヴ す る プ ロ モ ー タ ー の optimization, IRES を using し た multi-factor の 発 now at the same time, 検 に お け る タ グ の optimization (PTH planning write adjust と ビ タ ミ ン D に よ る inhibit へ dry involved し な い こ と の confirmation) な ど を line っ た. The <s:1> れら <s:1> improved <e:1> results, the ビタ ビタ <s:1> dependent な転 writing factor <e:1> 挙 dynamic <e:1> changes を are easy to に観 observe で るようになった るようになった るようになった. ま た, こ の is を 発 exhibition さ せ て, FGF let body FGFR1 と そ の (let body Klotho を 発 now total さ せ る こ と に よ り, cultivated land に group in え FGF23 タ ン パ ク qualitative を add す る こ と に よ っ て, PTH but 伝 の 発 now inhibit を モ ニ タ ー で き る is の build を try み た. Now ま で の と こ ろ, お お む ね successful し た よ う に see え て い る が, FGFR1 の キ ナ ー ゼ active の dependence や, Klotho の necessity, add す る FGF23 の concentration dependence な ど を 検 certificate in で あ る. One party, the vice thyroid function inhibition is の let body の ひ と つ で あ る Klotho の 発 now adjusting mechanism に つ い て, ゲ ノ ム match column の save を using し て, ヒ ト Klotho heritage 伝 son の planning write close to the starting point alongside か ら high is about 2.5 KB の van 囲 を ク ロ ー ニ ン グ し, レ ポ ー タ ー プ ラ ス ミ ド を made し た. Gata3 MafB - Gcm2 に え, さ ら に masato and す る possibility の あ る planning write factor の alternate と し て Tbx1, Six1, Pax1, Eya1 の 発 now プ ラ ス ミ ド を build し, planning to write activity を べ た.

项目成果

GSK3-mediated MafA phosphorylation is indispensable for cell growth

GSK3介导的MafA磷酸化对于细胞生长是不可或缺的

• 发表时间: 2021
• 作者: 金井 賢一;松井 貴輝;別所 康全;片岡 浩介
• 通讯作者: 片岡 浩介