足場非依存的増殖制御機構の解析

不依赖锚定的生长控制机制分析

• 批准号: 13214021
• 负责人: 神野 茂樹
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13214021/
• 关键词: 細胞周期; 足場非依存性増殖; NRK細胞; E2F; Cdk; Cdc6

培養細胞の癌形質の中でも足場非依存的増殖能獲得は、浸潤や転移の必要条件となる重要な性質である。癌細胞は足場が存在しなくともG1期からS期に進行するが、正常細胞の場合には足場が存在しないとG1期に停止する。我々は増殖因子EGF存在下では癌形質、非存在下では正常形質を示すNRK(正常ラット腎線維芽細胞)を用い、この足場非依存的増殖を引き起こす癌化シグナル伝達系を解析してきた。今回この癌化シグナル伝達経路の最終ターゲットを知るべく、NRK細胞を足場存在下で増殖開始させその後浮遊させて引き続き培養し、細胞周期制御因子群を解析した。足場存在下での培養が短いと細胞はEGF無しにはS期へ進行できない。このときCdk4,Cdk6,Cdk2が活性化し、E2Fの活性化も起こっていたがCdc6はmRNA,蛋白質ともに発現していなかった。EGF存在下ではCdc6が誘導されS期に進行する。逆にCdc6を大量発現した株ではこの条件でEGF非存在下でもS期への進行が有意に増加していた。以上のことから発癌刺激による足場非依存的増殖開始を決定する要因の一つにcdc6発現誘導があることが示された。ところがCdc6高発現株においても足場非依存的増殖停止するとCdc6タンパク質が経時的に消失する。このことは足場非依存的条件下におけるCdc6発現抑制は転写レベルおよび転写後レベルで制御されていることを意味する。この転写後制御はいかなるプロテアーゼによるものかインヒビターを用いた実験を試みた結果、この分解はカルパイン様プロテアーゼによるものであった。以上癌化シグナルはCdk4,6,2の活性化とともにCdc6の発現誘導(mRNAレベルでの誘導とともにタンバク分解系の抑制により)をひきおこし、その結果足場非依存的培養条件下での増殖を誘導するものと考えられた。

The essential conditions for the growth of cancer cells in vitro and in vitro are: Cancer cells have a foot field that exists in G1 phase and proceeds in S phase, while normal cells have a foot field that exists in G1 phase and stops in S phase. The expression of NRK in the presence and absence of EGF is related to the expression of normal cells. In this paper, the final stage of the cancer cell cycle pathway is analyzed. NRK cells are cultured in the presence of a sufficient field. In the absence of EGF, the cells were cultured in the presence of a foot-field for a short period of time. Cdk4, Cdk6, Cdk2 are activated, E2F is activated, Cdc6 mRNA is activated, and protein is activated. In the presence of EGF, Cdc6 could be induced in S phase. In the absence of EGF, the growth of CdC6 was increased intentionally. The above results indicate that the initiation of field-independent proliferation is determined by the presence of cdc6. Cdc 6 high growth rate, field independent growth rate, field independent growth rate Under the condition of field independence, Cdc 6 appears to inhibit the occurrence of negative reactions and negative reactions. This is the result of the test, the breakdown of the test. The activation and induction of Cdk4, 6, 2 and Cdc6 in the above cancer cells (mRNA expression and induction and inhibition of Cdk4, 6, 2 and Cdc6) were investigated under field-independent culture conditions.

项目成果

Jinno, S., Lin, J., Yageta, M., Okayama, H.: "Oncogenic cell cycle start control"Mutation Res.. 477. 23-29 (2001)

Jinno, S.、Lin, J.、Yageta, M.、Okayama, H.：“致癌细胞周期开始控制”Mutation Res.. 477. 23-29 (2001)

Isobe, H., Tomita, N., Jinno, S., Okayama, H., Nakamura, E.: "Synthesis and transfection capability of multi-fanctionalized fullerene polyamine"Chemistry Letters. 2001. 1213-1215 (2001)

Isobe, H.、Tomita, N.、Jinno, S.、Okayama, H.、Nakamura, E.：“多官能富勒烯多胺的合成和转染能力”化学快报。

Lin, J., Jinno, S., Okayama, H.: "Cdk6-cyclin D3 complex evades inhibition by inhibitor proteins and uniquely controls cell's proliferation competence"Oncogene. 20. 2000-2009 (2001)

Lin, J.、Jinno, S.、Okayama, H.：“Cdk6-细胞周期蛋白 D3 复合物逃避抑制剂蛋白的抑制，并独特地控制细胞的增殖能力”癌基因。

Jinno, S., Yageta, M., Nagata, A., Okayama, H.: "Cdc6 requeres anchorage for its expression"Oncogene. 21(in press). (2002)

Jinno, S.、Yageta, M.、Nagata, A.、Okayama, H.：“Cdc6 需要锚定来表达”癌基因。

神野茂樹: "転写制御と癌-細胞周期"Molecular Medicine. 38. 1453-1457 (2001)

Shigeki Jinno：“转录调控和癌细胞周期”《分子医学》38. 1453-1457 (2001)。