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Tollファミリー分子による病原体認識機構の解明とそれを応用した癌免疫療法の開発

阐明Toll家族分子的病原体识别机制以及利用其开发癌症免疫疗法

基本信息

批准号：
13214083
负责人：
三宅健介
金额：
$ 1.98万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13214083/
关键词：
RP105 MD-1 MD-2 Toll-like receptor LPS

项目摘要

グラム陰性菌の膜成分リポ多糖(LPS)を免疫細胞が認識する機構についての解析を進めた。LPSはToll-like Receptor4(TLR4)と我々が発見したTLR4会合分子MD-2による複合体TLR4/MD-2によって認識されることを我々は昨年報告した。本年はTLR4/MD-2のプロトタイプであり、我々が発見したRP105/MD-1複合体のLPS認識における役割をノックアウトマウスを用いて検討した。RP105ノックアウトマウスのB細胞は問題なく産生され、分化し、B細胞レセプター、CD40を介するシグナルには異常は認められなかったが、LPS刺激による増殖反応と抗体産生反応において低応答性を示した。低応答性のメカニズムを細胞株を用いて検討したところ、TLR4/MD-2とRPl05/MD-1が、B細胞におけるLPS認識において機能的に協力していることが明らかになった。TLR4は単独ではLPSを認識できず、MD-2が会合したTLR4/MD-2複合体になって初めてLPSを認識できる。MDタンパクはLPS認識に重要な役割を果たしている。このMDタンパクの機能解析を進め、以下の成果を得た。1.MDタンパクの役割を明らかにするために、昨年度のRP105ノックアウトマウスに続いてMD-1ノックアウトマウスを作成し、その解析を行った。またその解析のためにマウスMD-1に対するモノクローナル抗体も作製した。RPl05欠損B細胞はLPS低応答性を示すが、MD-1欠損B細胞も同様なLPS低応答性を示した。そこで、MD-1欠損B細胞の細胞表面でのRP105、MD-1の発現を調べてみると、MD1ばかりでなく、RP105の発現も検出できなかった。すなわち、MD-1がRPl05の細胞表面への発現に必須の分子である事が明らかになった。2.MD-2の機能解析としてlipid A誘導体を用いた実験を行った。Lipid IVaはLipid Aの誘導体であり、マウスにはアゴニストとして、ヒトにはアンタゴニストとして作用する。この種特異的な薬理作用がTLR4によって規定されるのか、MD-2によって規定されるのか検討するためにマウスTLR4/ヒトMD-2のキメラ複合体を発現する細胞株を確立し、LipidIVaに対する応答性を検討したところ、ヒトと同様にLipidIVaは拮抗剤として作用した。MD-1がRP105の発現に必須であることをノックアウトマウスを用いて示した。MD-2においても同様である可能性があり、MDタンパクはTLRの発現に重要な役割を果たしている可能性がある。さらにMDタンパクはTLR4によるLPS認識に必須の分子であることをLipid IVaを用いて示した。LipidIVaの結果はTLR4によるLPS認識の微妙な特異性がMD-2によって影響されることを示しており、TLR4のエンドトキシン認識にMD-2が直接関わっていることを示唆している。これらの結果は癌免疫療法のために免疫賦活剤を開発するうえで、TLRばかりでなくMDタンパクも標的分子となりうることを示唆している。

The membrane component of グラム-negative bacteria, リポ polysaccharide (LPS), and the immune cells are recognized and analyzed by the organization. LPS は Toll-like Receptor4 (TLR4) と我々発见したTLR4 meets the molecule MD-2 による complex TLR4/MD-2 によって知されることを我々は reported last year した. This year's TLR4/MD-2のプロトタイプであり、我が発见したRP105/M The D-1 complex's LPS recognizes the における伒ノックアウトマウスを用いて検した. RP105 ノックアウトマウスのB cell problem なく production され, differentiation し, B cell レセプター, CD40 するシAbnormality of グナルには recognizes められなかったが, LPS stimulates による to proliferate anti-antibodies and produces anti-antibodies, and shows low responsiveness. Low-responsive cell line, TLR4/MD-2 and RPl05/ MD-1 and B-cell LPS recognize the functions of the AI and cooperate with each other. TLR4 is independent and LPS is known, MD-2 is combined and TLR4/MD-2 complex is known and LPS is known. MDタンパクはLPS It is important to know the reason why it is so important. The functional analysis of このMDタンパクの has been carried out, and the following results have been obtained. 1.MD タンパクの丒明らかにするために、last year’s RP105ノックアウトマウスに続いてMD-1ノックアウトマウスを成し, そのanalytic を行った.またそのANALYSIS のためにマウスMD-1 に対するモノクローナルantibodies した. RP105 damaged B cells and showed low LPS responsiveness, and MD-1 damaged B cells and showed low LPS responsiveness. RP105 and MD-1 damage the cell surface of B cells. The tune is fine, the MD1 is fine, and the RP105 is fine.すなわち, MD-1がRPl05のcell surface への発成に必のmolecule である事が明らかになった. 2. Functional analysis of MD-2 and the use of lipid A derivatives. Lipid IVa is the inducer of Lipid A, and is the active ingredient of Lipid IVa. The specific therapeutic effect of TLR4 is regulated by TLR4 and MD-2. TLR4/ヒトMD-2のキメThe ラ complex has been established, the cell line has been established, and the response properties of LipidIVa have been established検検したところ、ヒトと同様にLipidIVaは antagonizes the effect of 椤としてした. MD-1's RP105 is a must-have. MD-2においても同様であるpossibility があり, MD タンパクはTLR の発成にimportant なservice cut を Fruit たしている possibility がある.さらにMDタンパクはTLR4によるLPS recognizes にMust-have molecule であることをLipid IVaを用いてshows した. LipidIVa's results and TLR4's subtlety and specificity for LPS recognition and MD-2's influence and impact.とをshows the しており, TLR4 のエンドトキシン recognizes the にMD-2 が and is directly related to わっていることをshows the 唆している.これらのRESULTSはCancer ImmunotherapyのためにImmune Activation剤を开発するうえで、TL The target molecule of RばかりでなくMDタンパクも is the となりうることをshows the している.