Tollファミリー分子による病原体認識機構の解明とそれを応用した癌免疫療法の開発

阐明Toll家族分子的病原体识别机制以及利用其开发癌症免疫疗法

• 批准号: 13214083
• 负责人: 三宅 健介
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13214083/
• 关键词: RP105; MD-1; MD-2; Toll-like receptor; LPS

グラム陰性菌の膜成分リポ多糖(LPS)を免疫細胞が認識する機構についての解析を進めた。LPSはToll-like Receptor4(TLR4)と我々が発見したTLR4会合分子MD-2による複合体TLR4/MD-2によって認識されることを我々は昨年報告した。本年はTLR4/MD-2のプロトタイプであり、我々が発見したRP105/MD-1複合体のLPS認識における役割をノックアウトマウスを用いて検討した。RP105ノックアウトマウスのB細胞は問題なく産生され、分化し、B細胞レセプター、CD40を介するシグナルには異常は認められなかったが、LPS刺激による増殖反応と抗体産生反応において低応答性を示した。低応答性のメカニズムを細胞株を用いて検討したところ、TLR4/MD-2とRPl05/MD-1が、B細胞におけるLPS認識において機能的に協力していることが明らかになった。TLR4は単独ではLPSを認識できず、MD-2が会合したTLR4/MD-2複合体になって初めてLPSを認識できる。MDタンパクはLPS認識に重要な役割を果たしている。このMDタンパクの機能解析を進め、以下の成果を得た。1.MDタンパクの役割を明らかにするために、昨年度のRP105ノックアウトマウスに続いてMD-1ノックアウトマウスを作成し、その解析を行った。またその解析のためにマウスMD-1に対するモノクローナル抗体も作製した。RPl05欠損B細胞はLPS低応答性を示すが、MD-1欠損B細胞も同様なLPS低応答性を示した。そこで、MD-1欠損B細胞の細胞表面でのRP105、MD-1の発現を調べてみると、MD1ばかりでなく、RP105の発現も検出できなかった。すなわち、MD-1がRPl05の細胞表面への発現に必須の分子である事が明らかになった。2.MD-2の機能解析としてlipid A誘導体を用いた実験を行った。Lipid IVaはLipid Aの誘導体であり、マウスにはアゴニストとして、ヒトにはアンタゴニストとして作用する。この種特異的な薬理作用がTLR4によって規定されるのか、MD-2によって規定されるのか検討するためにマウスTLR4/ヒトMD-2のキメラ複合体を発現する細胞株を確立し、LipidIVaに対する応答性を検討したところ、ヒトと同様にLipidIVaは拮抗剤として作用した。MD-1がRP105の発現に必須であることをノックアウトマウスを用いて示した。MD-2においても同様である可能性があり、MDタンパクはTLRの発現に重要な役割を果たしている可能性がある。さらにMDタンパクはTLR4によるLPS認識に必須の分子であることをLipid IVaを用いて示した。LipidIVaの結果はTLR4によるLPS認識の微妙な特異性がMD-2によって影響されることを示しており、TLR4のエンドトキシン認識にMD-2が直接関わっていることを示唆している。これらの結果は癌免疫療法のために免疫賦活剤を開発するうえで、TLRばかりでなくMDタンパクも標的分子となりうることを示唆している。

Bacterium of negative of グ ラ ム の membrane composition リ ポ polysaccharide (LPS) を immune cells が know す る institutions に つ い て の parsing を into め た. LPS は Toll - like Receptor4 (TLR4) と I 々 が 発 see し た meet TLR4 molecular MD - 2 に よ る complex TLR4 / MD - 2 に よ っ て know さ れ る こ と を I 々 は yesterday reported in し た. This year は TLR4 / MD - 2 の プ ロ ト タ イ プ で あ り, I 々 が 発 see し た RP105 / MD - 1 complex の LPS know に お け る service cut を ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス を with い て beg し 検 た. RP105 ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス の B cells は problem な く produce さ し れ, differentiation, cell B レ セ プ タ ー, CD40 を interface す る シ グ ナ ル に は abnormal は recognize め ら れ な か っ た が, LPS stimulation に よ る rights reside the 応 と antibodies against 応 に お い て low 応 を and shown a sex し た. Low 応 a sexual の メ カ ニ ズ ム を cell lines を with い て beg し 検 た と こ ろ, TLR4 / MD - 2 と RPl05 が / MD - 1, B cell に お け る LPS know に お い て functionary に together し て い る こ と が Ming ら か に な っ た. TLR4 は 単 alone で は LPS を know で き ず, MD - 2 meet が し た TLR4 / MD - 2 complex に な っ て early め て LPS を know で き る. MDタ パ パ パ な LPS recognize に important な harvest を fruit た て て る る る. The function analysis of the <s:1> <s:1> MDタ パ パ <s:1> を goes to め, and the following <s:1> results を give た. Cut 1 MD タ ン パ ク の service を Ming ら か に す る た め に, yesterday's annual の RP105 ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス に 続 い て MD - 1 ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス を し, consummate そ の parsing line を っ た. Youdaoplaceholder0 <s:1> analysis of またそ ために ウス ウスMD-1に against するモノ ロ ロ ナ ナ <s:1> antibody た production た た. Low <s:1> LPS in RPl05 underdamaged B cells を response を shows すが, and the same is true for MD-1 underdamaged B cells な low LPS 応 response を shows た. そ こ で owe loss, MD - 1 B cells の surface で の RP105, MD - 1 の 発 now を adjustable べ て み る と, MD1 ば か り で な く, RP105 の 発 now も 検 out で き な か っ た. Youdaoplaceholder0, MD-1がRPl05 へ cell surface へ へ に necessary <s:1> molecular である phenomena が light ら になった になった になった. 2.MD-2 <s:1> function analysis と てlipid A inducer を Use た た experiment を to った. Lipid IVa は Lipid A の inductor で あ り, マ ウ ス に は ア ゴ ニ ス ト と し て, ヒ ト に は ア ン タ ゴ ニ ス ト と し て role す る. こ の species specific な 薬 conditioning が TLR4 に よ っ て rules さ れ る の か, MD - 2 に よ っ て rules さ れ る の か beg す 検 る た め に マ ウ ス TLR4 / ヒ ト MD - 2 の キ メ ラ complex を 発 now す る cell lines を establishing し, LipidIVa に す seaborne る 応 a sexual を beg し 検 た と こ ろ, ヒ ト と with others に LipidI The Va <s:1> antagonist と て acts on た. The occurrence of MD-1がRP105 に must be represented by である である とをノッ アウト アウト ウスを ウスを by て て. MD - 2 に お い て も with others で あ る possibility が あ り, MD タ ン パ ク は TLR の 発 に now important な "を cut fruit た し て い る possibility が あ る. さ ら に MD タ ン パ ク は TLR4 に よ る LPS must know に の molecular で あ る こ と を Lipid IVa を with い て in し た. LipidIVa の results は TLR4 に よ る LPS know の subtle な specificity が MD - 2 に よ っ て influence さ れ る こ と を shown し て お り, TLR4 の エ ン ド ト キ シ ン know に MD - 2 が directly masato わ っ て い る こ と を in stopping し て い る. こ れ ら の results は cancer immunotherapy の た め に immune activating tonic を open 発 す る う え で, TLR ば か り で な く MD タ ン パ ク も target molecules と な り う る こ と を in stopping し て い る.

项目成果

Nagai, Y.: "Requirement for MD-I in Cell Surface Expression of RP105/CD180 and B Cell Responsiveness to Lipopolysaccharide"Blood. 99. 1699-1705 (2002)

Nagai，Y.：“RP105/CD180 的细胞表面表达和 B 细胞对脂多糖的反应性中 MD-1 的要求”血液。

Termeer, C.: "Oligosaccharides of Hyaluronan Activate Dendritic Cells via Toll-like Receptor 4"J. Exp. Med.. 195. 99-111 (2002)

Termeer, C.：“透明质酸寡糖通过 Toll 样受体 4 激活树突状细胞”J。

Akashi, S.: "Human MD-2 Confers on Mouse Toll-like Receptor 4 Species-specific LPS Recognition"Int.Immunol.. 13. 1595-1599 (2001)

Akashi, S.：“人类 MD-2 赋予小鼠 Toll 样受体 4 物种特异性 LPS 识别”Int.Immunol.. 13. 1595-1599 (2001)

Watanabe, Y.: "Differentiation stages of eosinophils characterized by hyaluronic acid binding via CD44 and responsiveness to stimuli"DNA Cell Biol.. 20. 189-202 (2001)

Watanabe, Y.：“嗜酸性粒细胞的分化阶段，其特征是通过 CD44 与透明质酸结合以及对刺激的反应性”DNA Cell Biol.. 20. 189-202 (2001)

Kaji, K.: "Functional association of CD9 with the Fcg receptors in macrophages"J. Irnmunol.. 166. 3256-3265 (2001)

Kaji, K.：“CD9 与巨噬细胞中 Fcg 受体的功能关联”J.