p53標的遺伝子の単離とその機能解析

p53靶基因的分离及其功能分析

• 批准号: 13216031
• 负责人: 荒川 博文
• 金额: $ 4.48万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13216031/
• 关键词: 癌抑制遺伝子; p53; 転写因子; 標的遺伝子; マイクロアレイ; 遺伝子治療; アポトーシス; 細胞周期

癌抑制遺伝子p53はあらゆる種類の癌において、その半数以上に変異の検出される転写因子で、その標的遺伝子の転写活性を制御することによつて癌抑制機能を発揮する。癌発症の機序解明と有効ながん治療法の開発のためにはp53の生理機能の全貌解明が最も重要であり、そのためには全p53標的遺伝子の単離が不可欠と考えられる。アデノウイルスに組み込んだp53遺伝子の導入により顕著なアポトーシスが誘導される3種類のp53変異細胞株(グリオーマ細胞株・大腸癌細胞株・肺癌細胞株)を用い、p53依存性の発現誘導を示す遺伝子群についてマイクロアレイ法によつて解析した。p53依存性に強く発現誘導される遺伝子群を抽出し、それらの遺伝子についてDNA損傷刺激により活性化した内因性p53による発現誘導の有無をRT-PCRおよびノザンブロットにて確認した。p53依存性の発現誘導が確認された遺伝子については、さらにヒトゲノムDNAデータ・ベースから対応するゲノムDNAの塩基配列を引用してp53結合配列の有無を検索し、クロマチン免疫沈降法・EMSA法・レポーターアッセイ法によって、直接のp53標的遺伝子群をさらに選別した。グリオーマ細胞株を用いたスクリーニングにより、最終的には26の有力な候補標的遺伝子が明らかとなり、うち15遺伝子についてはすでに直接の新規p53標的遺伝子であることが証明された。同様に進められている大腸癌細胞株および肺癌細胞株を用いたスクリーニングにおいてもそれぞれのオーバーラップを除いた数で、同数程度(約20〜30)の候補標的遺伝子に絞り込まれる見込みである。最終的には既知p53標的遺伝子と併せて100近くの遺伝子が明らかとなる可能性が高い。このように、p53はかなり多くの標的遺伝子を様々な状況に応じて使い分け、その多彩な生理機能を巧妙に制御することで細胞の安全な生存を維持しているものと考えられる。最終的に出揃った標的遺伝子群とp53による制御の仕組みの解明によって、その癌抑制機序の全貌が明らかとなるであろう。このことは、発癌機序解明において強力な手がかりを与えると考えられる。また、アポトーシス関連標的遺伝子を応用した遺伝子治療は、これまでp53遺伝子治療耐性であった癌細胞においても新しい戦略を可能にすると考えられる。

Cancer inhibition of heritage 伝 son p53 は あ ら ゆ る kinds の carcinoma に お い て, そ の half に - different の 検 out さ れ る planning write factor で, そ の mark heritage 伝 son の planning write activity を suppression す る こ と に よ つ て cancer inhibition function を 発 swing す る. Carcinoma and interpret と 発 disease の machine have sharper な が ん therapy の open 発 の た め に は p53 の physiology の whole interpret が も most important で あ り, そ の た め に は all traces of p53 target 伝 son の 単 from が not owe と exam え ら れ る. ア デ ノ ウ イ ル ス に group み 込 ん だ p53 heritage 伝 son の import に よ り 顕 the な ア ポ ト ー シ ス が induced さ れ る 3 kinds の p53 - different cell lines (グ リ オ ー マ cell lines, colorectal cancer cell lines, lung cancer cell line) を い, p53 dependency の 発 induced を now shown す heritage 伝 subgroup に つ い て マ イ ク ロ ア レ イ method に よ つ て parsing し た. P53 strong dependence に く 発 now induced さ れ る heritage 伝 subgroup を spare し, そ れ ら の posthumous son 伝 に つ い て DNA damage to stimulate に よ り activeness し た endogenous p53 に よ る 発 now have induced の without を rt-pcr お よ び ノ ザ ン ブ ロ ッ ト に て confirm し た. P53 dependency の 発 induced が now confirmed さ れ た posthumous son 伝 に つ い て は, さ ら に ヒ ト ゲ ノ ム DNA デ ー タ · ベ ー ス か ら 応 seaborne す る ゲ ノ ム DNA の salt base with column を reference し て p53 combined with column の whether を 検 し and ク ロ マ チ ン immune sink method, method of EMSA, レ ポ ー タ ー ア ッ セ イ method に よ っ て, direct の p53 The remaining 伝 subgroup をさらに selects た. グ リ オ ー マ cell lines を with い た ス ク リ ー ニ ン グ に よ り, eventually に は 26 の な alternate mark strong heritage 伝 son が Ming ら か と な り, う ち 15 heritage 伝 son に つ い て は す で に directly の new rules of p53 mark heritage 伝 son で あ る こ と が prove さ れ た. With others in に into め ら れ て い る colorectal cancer cell lines お よ び lung cancer cell lines を with い た ス ク リ ー ニ ン グ に お い て も そ れ ぞ れ の オ ー バ ー ラ ッ プ を except い た で, with several degree (about 20 ~ 30) の alternate mark heritage 伝 son に ground り 込 ま れ る see 込 み で あ る. Final に は both p53 target but 伝 of children と and せ て nearly 100 く の heritage 伝 son が Ming ら か と な が high い る possibilities. こ の よ う に, p53 は か な り more く の mark heritage 伝 son を others 々 な condition に 応 じ て make い け, そ の colorful な physiology を clever に suppression す る こ と の security な survival を で cells し て い る も の と exam え ら れ る. But eventually に out Jian っ た mark 伝 subgroup と p53 に よ る suppression の blackstone group み の interpret に よ っ て, そ の carcinoma の inhibit machine whole が Ming ら か と な る で あ ろ う. <s:1> と えられる, explanation of the sequence of cancer occurrence にお て て, powerful な hand が を and えると examination えられる. ま た, ア ポ ト ー シ ス masato even mark heritage 伝 son を 応 with し た heritage 伝 treatment は, こ れ ま で p53 heritage 伝 child treat patient で あ っ た cancer に お い て も new し い 戦 may slightly を に す る と exam え ら れ る.

项目成果

Mori, T.: "Identification of the interferon regulatory factor 5 gene (IRF-5) as a direct target for p53"Oncogene. (in press).

Mori, T.：“干扰素调节因子 5 基因 (IRF-5) 作为 p53 直接靶标的鉴定”癌基因。

Ochi, K.: "Identification of Semaphorin3B as a direct target of p53"Neoplasia. 4. 82-87 (2002)

Ochi, K.：“识别 Semaphorin3B 作为 p53 的直接靶点”肿瘤。

Yamaguchi, T.: "p53R2-dependent pathway for DNA synthesis in a p53-regulated cell cycle checkpoint"Cancer Research. 61. 8256-8262 (2001)

Yamaguchi, T.：“p53 调节的细胞周期检查点中 DNA 合成的 p53R2 依赖性途径”癌症研究。

Okamura S: "p53DINP1, a p53-inducible gene, regulates p53-dependent apoptosis"Molecular Cell. 8. 85-94 (2001)

Okamura S：“p53DINP1，一种 p53 诱导基因，调节 p53 依赖性细胞凋亡”分子细胞。

Mori, T.: "Cyclin K as a direct transcriptional target of the p53 tumor suppressor"Neoplasia. (in press).

Mori, T.：“细胞周期蛋白 K 作为 p53 肿瘤抑制因子的直接转录靶点”肿瘤形成。