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リングフィンガー型ユビキチンリガーゼ活性を持つがん遺伝子産物の研究

具有环指泛素连接酶活性的癌基因产物的研究

基本信息

批准号：
13216100
负责人：
安田秀世
金额：
$ 2.82万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13216100/
关键词：
p53 SUMO E3 PIAS

项目摘要

p53のSUMO化のE3、SUMOリガーゼの同定SUMO化の過程はユビキチン化の過程と似通っていると考えられ、ユビキチン化にみられるE1、E2酵素はそれぞれSua1/Uba2、Ubc9として同定されている。ところがタンパク質基質を認識し、ユビキチン化する酵素E3、ユビキチンリガーゼに相当するSUMOリガーゼは同定されていなかった。そこで酵母は哺乳類のSUMOを結合できるUbc9を持っていることからSUMOをバイト(餌)にして2-ハイブリッド法を行ったところ得られたクローンの中にリングフィンガー様構造を持った遺伝子が存在した。このリングフィンガー様構造を持つタンパク質はこのE3の可能性が考えられた。このタンパク質はヒトPIAS1タンパク質のマウス相同遺伝子、miz1であった。そこでヒトPIAS1を用いてSUMOのE2であるhUbc9との結合を酵母2-ハイブリッド法により検討した。その結果SUMOのE2、hUbc9の結合が観察された。実際にU2OS細胞にp53、SUMO、PIAS1を移入すると、PIAS1の存在に依存して、p53は強くSUMO化され、また、PIAS1のリングフィンガー様構造の変異体ではこのような作用は観察されなかった。PIAS1が細胞内でp53のSUMO化を促進したことからSUMO-E3の可能性が示唆された。そこで次にPIAS1のin vitroでの酵素活性を検討した。p53、SUMO、hUbc9、PIAS1それぞれを大腸菌、あるいはバキュロウイルス系を用いて昆虫細胞で発現させ精製した後、in vitroでp53のSUMO化反応を検討した。その結果、p53のSUMO化はPIAS1存在下で強くみられ、PIAS1がSUMO-E3として働く可能性が強く示唆された。

The SUMO of p53 is transformed into E3, SUMO and E1, E2 enzymes. The SUMO of p53 is transformed into E3, SUMO and E1, E2 enzymes. The SUMO of p53 is transformed into E3, SUMO and E1, E2 enzymes. The enzyme E3, the enzyme E3, the enzyme E3, The yeast has the ability to bind to the SUMO of mammals. The yeast has the ability to bind to the SUMO of mammals. The possibility of E3 is examined in this paper. This is the first time I've ever seen a woman who's been in a relationship with someone else. The PIAS1 is used in combination with the SUMO E2. The results of SUMO and E2, hUbc9 and their combinations were investigated. In fact, U2OS cells are p53, SUMO, PIAS1, PIAS1, PIAS1 PIAS1 promotes SUMO of p53 in cells, indicating the possibility of SUMO-E3. The enzyme activity of PIAS1 in vitro was investigated. p53, SUMO, hUbc9, PIAS1 are both developed in E. coli and purified in vitro using insect cells. As a result, SUMO of p53 is strongly correlated with PIAS1, and PIAS1 is strongly correlated with SUMO-E3.