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p53のユビキチン経路における分解

泛素通路中 p53 的降解

基本信息

批准号：
11139265
负责人：
安田秀世
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11139265/
关键词：
p53 ユビキチン MDM2 MDMX p73 DNA依存性タンパク質りん酸化酵素

项目摘要

(研究目的)癌抑制遺伝子産物p53がDNA損傷に呼応して細胞内含量が増加することが知られているが、この増加はp53のユビキチン-プロテオソーム系による分解が抑えられる為と考えられる。E6/E6AP、ユビキチンリガーゼが作用するパピローマウイルス16、18型が感染している細胞ではウイルス由来タンパク質E6が細胞内タンパク質E6APと結合し、p53のユピキチンリガーゼとして作用するごとが明かとなっている。ところが上記ウイルスが感染していない細胞でのp53のユピキチン化の機構は明かになっていない。そこでこの機構を明かにしていくことがp53の細胞内での安定化、不安定化を考えるために重要と考えられる。そこでp53のユビキチンリガーゼの同定と諸性質を明かにすることを研究の目的とした。(結果)各種タンパク質をバキュロウイルス発現系、大腸菌発現系を用いて発現、精製後、ビオチン標識ユビキチンを用いて試験管内でタンパク質のユビキチン化反応をおこなった。ビオチン標識ユピキチン化タンパク質はSDSポリアクリルアミド電気泳動の後、パーオキシダーゼ標識アピジンによって検出した。点突然変異はPCR法を用いて導入した。1、MDM2はE1およびE2としてUBCH5存在下、p53をユピキチン化するユピキチンリガーゼとして働き、また自己もユビキチン化する活性を持つ。また、DNA依存性タンパク質りん酸化酵素でりん酸化されたp53はこのユビキチン化を受けなくなった。2、MDM2のC末に存在するリングドメイン構造を点突然変異導入によって破壊するとユビキチンリガーゼ活性は消失した。3、MDM2の構造類似タンパク質MDMXにはユビキチンリガーゼ活性が存在しなかった。これはMDMXのC末にあるリングドメイン様構造は完全なものでない為と考えられる。4、p53類縁癌抑制遺伝子産物p73α、βいずれもMDM2によるユピキチン化は観察されなかった。

(Objective) The tumor suppressor gene product p53 increases cell content due to DNA damage, and the increase of p53 in the DNA damage response system is examined. E6/E6AP, p53, p54, p55, p56, p57, p58, p59, p59, p59 The p53 cells are infected by the virus and the p53 cells are infected by the virus. The mechanism of p53 in cells is stable and unstable. The purpose of this study is to clarify the nature of the problem. (Results) All kinds of bacteria were detected and purified in the test tube. The color of the film is different from the color of the film. The PCR method was used to detect the mutation of DNA. 1. In the presence of E1 and E2 and UBCH5, MDM2 maintains activity in the form of p53. DNA-dependent enzyme p53 2. MDM2's C terminal exists, and the structure of MDM2 suddenly changes. 3. MDM2 is similar in structure to MDMX. The structure of MDMX is completely different from that of C. 4. p53-like cancer suppressor gene product p73α, β-containing MDM2