哺乳類細胞の分裂期染色体凝縮、脱凝縮の制御機構

哺乳动物细胞有丝分裂染色体凝聚与解凝聚的控制机制

• 批准号: 09263212
• 负责人: 安田 秀世
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Tokyo University of Pharmacy and Life Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09263212/
• 关键词: myt1キナーゼ; wee1キナーゼ; サイクリンB; APC; ユビキチン; p53; MOM2; Cut2

バキュロウイルス系で発現、精製したmyt1はcyclinE/CDK2を燐酸化せず、cyclinB/cdc2を特異的に燐酸化し、wee1はcdc2およびCDK2のいずれをも燐酸化した。一方、Sf-9細胞中ではmyt1はcyclinB/cdc2の14Thrおよび15Tyrの両残基を燐酸化したがcyclinE/CDK2を基質としなかった。wee1はcdc2キナーゼ、CDK2いずれも燐酸化した。この時、cdc2キナーゼに対してはmyt1による燐酸化がwee1キナーゼによる燐酸化より効率が高かった。またp35/CDK5はwee1により燐酸化されたがmyt1による燐酸化は観察されなかった。以上よりmyt1、wee1はCDKsの基質特異性に違いがあることが確認された。それら酵素の細胞内局在はHeLa細胞中でGFPとの融合蛋白質として発現したwee1は核に局在するのに対して、myt1は細胞質に存在し、myt1の配列中に含まれる膜局在シグナルと思われる領域を欠損させるとこの局在は解消され、細胞内に均一に存在するようになった。APCに関係してはGST-サイクリンB/cdc2複合体、ビオチン化ユビキチンを基質として、マウスユビキチン活性化酵素(E1)とHeLa細胞の抽出液を酵素源としたin vitroサイクリンBユビキチン化の系を用いてサイクリンBのユビキチン化に関与するE2、hE2Cを単離した。またこのhE2Cは分裂酵母のCut2もdestruction box依存的にユビキチン化した。さらにこのhE2Cを餌に酵母2ハイブリッド系により新規遺伝子を単離した。この遺伝子はユビキチンリガーゼの活性を有していた。このE3様タンパク質がサイクリンB特異的であり、APCの成分であるかどうか興味深いところである。またこのユビキチン化の研究段階で癌抑制遺伝子産物p53をユビキチン化するリガーゼとして癌遺伝子MDM2を同定した。

CyclinE/CDK2 phosphorylation, cyclinB/cdc2 phosphorylation, we1 phosphorylation, cdc2 phosphorylation, and CDK2 phosphorylation In Sf-9 cells, myt1 and cyclinB/cdc2 were phosphorylated at 14 and 15 Thr residues, respectively, and cyclinE/CDK2 was phosphorylated at 15 and 15 Thr residues, respectively. Wee1, cdc2, CDK2, cdk, cdcdk, cdk, cdcdk, cdcd The rate of phosphorylation of cdc2 is very high. p35/CDK5 is a protein inhibitor for myt1. The above myt1, wee1 and CDKs are matrix specific. The fusion protein of GFP was found in HeLa cells, myt 1 was found in cytoplasm, myt 1 was found in membrane, and the fusion protein was found in HeLa cells. APC is related to GST-Sericin B/cdc2 complex, Sericin B/cdcdc2 complex, Sericin B/cdcdc The hE2C split yeast cut2 destruction box dependent on the request This is the first time I've ever seen a new strain of yeast This is the first time I've ever seen a woman. E3: The quality of the product is different from that of B: the composition of APC is different. In this research phase, cancer suppressor gene p53 was identified.

项目成果

Funabiki,H.: "Fission yeast Cut2 required for anaphase has two distruction boxes" EMBO J.16・19. 5977-5987 (1997)

Funabiki, H.：“后期所需的裂殖酵母 Cut2 有两个破坏盒” EMBO J.16・19 (1997)。

Honda,R.: "Oncoprotein MDM2 is a ubiquitin ligase E3 for tumor sappressor p53" FEBS Letters. 420. 25-27 (1997)

Honda,R.：“癌蛋白 MDM2 是肿瘤抑制蛋白 p53 的泛素连接酶 E3”FEBS Letters。