DNA複製制御におけるサイクリン依存性キナーゼ(cdk)の役割

细胞周期蛋白依赖性激酶 (CDK) 在调节 DNA 复制中的作用

• 批准号: 04256211
• 负责人: 安田 秀世
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04256211/
• 关键词: weel; cdc2キナーゼ; cdk2; サイクリン; フォスファターゼ; cdc25; 細胞周期

分裂酵母のweel変異を相補できるヒトweel遺伝子産物を大腸菌内で発現精製し、その酵素活性を検討した。その結果ヒトweelキナーゼはサイクリンB/cdc2キナーゼのTyr-15を燐酸化しその活性を阻害することを明らかにした。しかしこの酵素はThr-14を燐酸化できなかった。このことはThr-14を燐酸化しp34^<cdc2>キナーゼ活性を阻害する新たなキナーゼが存在することを示唆している。一方、3種のヒトcdc25フォスファターゼを大腸菌内で発現させ、これら酵素の活性も検討した。前記したp34^<cdc2>キナーゼの燐酸化による活性阻害はこのヒトcdc25フォスファーターゼにより回復する。3種存在するヒトcdc25フォスファターゼのうち少なくともcdc25BはこのTyr-15のみならずThr-14の燐酸基も脱燐酸化し、その活性を上昇させる。さらにcdk2の活性制御に関連してこの酸素の燐酸化部位を検討したところTyr-15とThr-160が確認された。このThr-160が燐酸化されるとSDS電気泳動で移動度が速くなり、これは蛋白質、p34^<cdc2>キナーゼを含め、一般に、燐酸化されると移動度が遅くなる現象とは異なる。サイクリンA結合cdk2はこのThr-160の燐酸化体であったことから、サイクリン結合にはこのThr-160の燐酸化が必要であると考えられた。サイクリンA/cdk2のTyr-15の燐酸はヒトCDC25フォスファターゼではサイクリンB/cdc2キナーゼのようには効率よく脱燐酸化されず、この原因がサイクリン蛋白質の違いによるのかどうか、Tyr-15の生理的意味を含めて興味深い。

Split yeast の weel - different fill を phase で き る ヒ ト weel heritage 伝 zi chan を coliform in で 発 refined し, そ の enzyme activity を beg し 検 た. そ の results ヒ ト weel キ ナ ー ゼ は サ イ ク リ ン B/cdc2 キ ナ ー ゼ の Tyr to 15 を 燐 acidification し そ の active を resistance against す る こ と を Ming ら か に し た. <s:1> craglytic enzyme った Thr-14を phosphorescence で な な った った. こ の こ と は Thr - 14 を 燐 acidification し p34 ^ < cdc2 > キ ナ ー ゼ active を resistance against す る new た な キ ナ ー ゼ が exist す る こ と を in stopping し て い る. In one and three types of <s:1> ヒトcdc25フォスファタ ゼを ゼを ゼを escherichia coli, で were found to have させ and <s:1> れら れら enzyme <s:1> activity 検 and 検 were found to have た. Remember before し た p34 ^ < cdc2 > キ ナ ー ゼ の 燐 acidification に よ る active resistance against は こ の ヒ ト cdc25 フ ォ ス フ ァ ー タ ー ゼ に よ り reply す る. Three kinds of existing す る ヒ ト cdc25 フ ォ ス フ ァ タ ー ゼ の う ち less な く と も cdc25B は こ の Tyr to 15 の み な ら ず Thr - 14 の 燐 acid base も 燐 acidification し, そ の active を rise さ せ る. さ ら に cdk2 の active suppression に masato even し て こ の acid element の 燐 acidification parts を beg し 検 た と こ ろ Tyr to 15 と Thr - 160 が confirm さ れ た. こ の Thr - 160 が 燐 acidification さ れ る と SDS electric 気 swimming で が speed mobile degrees く な り, こ れ は protein, p34 ^ < cdc2 > キ ナ ー ゼ を め, general に, 燐 acidification さ れ る と mobile degrees が 遅 く な る phenomenon と は different な る. サ イ ク リ ン A combination cdk2 は こ の Thr - 160 の 燐 acidification body で あ っ た こ と か ら, サ イ ク リ ン combining に は こ の Thr - 160 の 燐 acidification が necessary で あ る と exam え ら れ た. サ イ ク リ ン A/cdk2 の Tyr to 15 の 燐 acid は ヒ ト CDC25 フ ォ ス フ ァ タ ー ゼ で は サ イ ク リ ン B/cdc2 キ ナ ー ゼ の よ う に は sharper rate よ く 燐 off acidification さ れ ず, こ の reason が サ イ ク リ ン protein の violations い に よ る の か ど う か, Tyr to 15 の physical means を め て tumblers deep い.

项目成果

M.Kitagawa: "Cdc2-like knase is assocated with the retino-blastoma protein" Oncogene. 7. 1067-1074 (1992)

M.Kitakawa：“Cdc2 样激酶与视网膜母细胞瘤蛋白”Oncogene 相关。

M.Kusubata: "p13^<suc1> supprresses the catalytic function of p34^<cdc2> kinase for intermediate filament proteins." J.Biol.Chem.267. 20937-20942 (1992)

M.Kusubata：“p13^<suc1> 抑制 p34^<cdc2> 激酶对中间丝蛋白的催化功能。”

H.Yasuda: "Cyclin dependent kinase 2(cdk2)in the murine cdc2 kinase ts muatant" Somatic Cell and Mol.Genet.18. 403-408 (1992)

H.Yasuda：“鼠 cdc2 激酶 ts 突变体中的细胞周期蛋白依赖性激酶 2(cdk2)”体细胞和 Mol.Genet.18。

R.Honda: "The cell cycle regulator,human p50^<wee1> is a tyrosine kinase and not a serine/tyrosine kinase." Biochem.Biophys.Res.Commun.186. 1333-1338 (1992)

R.Honda：“细胞周期调节剂，人类 p50^<wee1> 是一种酪氨酸激酶，而不是丝氨酸/酪氨酸激酶。”

M.Yamashita: "M-phase specific histone H1 kinase from fish oocytes;its purification,oomponents and biochemical properties." Eurp.J.Biochem.205. 537-543 (1992)

M.Yamashita：“来自鱼卵母细胞的 M 期特异性组蛋白 H1 激酶；其纯化、成分和生化特性。”