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分裂期染色体の脱凝縮を制御する遺伝子の解明

阐明控制有丝分裂染色体解聚的基因

基本信息

批准号：
08274216
负责人：
安田秀世
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08274216/
关键词：
サイクリンB サイクロソームユビキチン E2

项目摘要

M期の終了にはサイクリンBの分解に依存したMPFの不活性化が必要であり、サイクリンBはM期中期から後期の移行期に分解される。このサイクリンBの分解はユビキチン化に依存したプロテアソーム系を介して行われると考えられている。ユビキチン化はE1,E2およびAPC(Anaphase-promotingcompex)またはサイクロソームと呼ばれる複合酵素系で行われると考えられているが未だその酵素活性の調節機構は明らかになっていない。そこで哺乳動物細胞を用いたサイクリンBのユビキチン化の系の開発とともに、ユビキチン化酵素の同定を試みた。バキュロウイルス系で発現させたGST-サイクリンB融合蛋白質/cdc2複合体、ビオチン化ユビキチンを基質として、マウスユビキチン活性化酵素(E1)とHeLa細胞の抽出液を酵素源としたin vitroサイクリンBユビキチン化の系を確立した。この系に大腸菌で発現させた各種ヒトユビキチン輸送蛋白(E2)を添加したところUBC4とUBCH5はサイクリンBのユビキチン化を著しく促進したが、UBC3、E2-EPFには促進効果はなかった。一方最近、クラム、XenopusサイクリンB特異的E2-C,UBCxが単離された。我々はそのヒトホモログhE2-Cを単離し、サイクリンBのユビキチン化を調べたところ活性は分裂期抽出液存在下で高く、しかもサイクリンB単量体よりもサイクリンB/cdc2複合体が良い基質となった。そのことからここで単離したhE2-CはサイクリンB特異的E2として働き、M期特異的E3の存在下にサイクリンBのユビキチン化を行うと考えられた。一方染色体脱凝縮が温度感受性であるtsTM13細胞はこのユビキチン化酵素活性が低いとの結果が得られた。即ちこの変異細胞では高温でサイクリンBのユビキチン化が欠損していることによりM期からG1期への移行が行われないと考えられる。

The end of the M period is the decomposition of the M period, and the inactivation of the MPF is necessary.このサイクリンBのbreakdownはユビキチン化にdependencyしたプえられている.ユビキチン化はE1,E2およびAPC(Anaphase-promotingcompex)またはサイクロThe ソームとHUばれる compound enzyme system is a regulatory mechanism for the enzyme activity of the われると考えられているが无だそのenzyme activity. Mammalian cells are tested using the same enzymes as the enzymes that are used to treat mammalian cells. GST-サイクリンB fusion protein/cdc2 complex, ビオチン化ユビキチンを matrix として, マウスユビキチン activated enzyme (E1) and HeLa cell extract を enzyme source としたin The established system of vitroサイクリンBユビキチン化の性を.この-type Escherichia coli is present in various ヒトユビキチン transport protein (E2) を added したところUBC4とUBCH 5はサイクリンBのユビキチン化を出しくpromoting effectしたが, UBC3, E2-EPFにはpromoting effectはなかった. The most recent one is the E2-C, UBCx が単里された, which is unique to Korra and Xenopus サイクリンB. 々はそのヒトホモログhE2-Cを単利し、サイクリンBのユビキチン化を动べたところACTIVE cleavage period draw In the presence of effluent, the high-quality and high-quality matrix of the high-quality B/cdc2 complex B unit is used. E2として働き, in the presence of M-phase-specific E3, it can be used to treat the disease. On the one hand, the decondensation of chromosomes in the temperature-sensitive TM13 cells resulted in low enzyme activity and low temperature resistance. That is, ちこの変different cells ではhigh temperature でサイクリンBのユビキチン化が无码していることによりM period からG1 period への行が行われないと考えられる.