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分裂期染色体の脱凝縮の制御機構

有丝分裂染色体解凝聚的控制机制

基本信息

批准号：
07282216
负责人：
安田秀世
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07282216/
关键词：
wee1キナーゼ 14-3-3 tsTM13 染色体凝縮

项目摘要

染色体凝縮、脱凝縮に関与するcdc2キナーゼの活性制御機構の中でwee1キナーゼに注目し、wee1キナーゼ活性制御因子を酵母two-hybrid法を用い、マウスwee1キナーゼと結合する蛋白質として単離することを試みた。その結果、ラット14-3-3ζとアミノ酸レベルで99.6%相同性をもつマウスcDNAが単離された。14-3-3はRaf-1やBcr-Ablなどのキナーゼに結合してその活性を制御しているとの報告がある。このマウス14-3-3ζをMBPやGSTの融合蛋白質として大腸菌で発現させ、バキュロウイルスで発現させたwee1との結合について調べたところ、非燐酸化型weelおよびcdc2キナーゼにより燐酸化されたweelのいずれにも結合することが明らかとなった。cdc2キナーゼにより燐酸化されたweelはcdc2/cyclinBと結合しているが、この複合体にも14-3-3ζは結合した。また、こり結合はキナーゼドメインを含むC末領域においてみられ、制御ドメインであるN末領域には結合しなかった。現在14-3-3ζのwee1キナーゼ活性に対する効果を検討中である。一方染色体脱凝縮の制御機構が温度感受性であると考えられるtsTM13細胞についてはヒトゲノムDNA、neo遺伝子の移人、Alu配列をプローブにして2次復帰株のゲノムDNAライブラリーからおよそ20KbのゲノミックDNAがこのtsTM13細胞を相補する遺伝子として単離した。それをプローブにもちいてマウスcDNAライブラリーからcDNAを単離した。その結果このcDNAは未だ報告されていない遺伝子であった。一部タリンと相同性が高いが、それがどのような意味を持っているのかは今後の課題である。

The relationship between chromosome condensation and decondensation and the activity of the control mechanism of cdc2キナーゼの中でwee1キナーゼにfocusし、wee1キナーゼactivity The control factor is the yeast two-hybrid method, and the yeast is combined with the protein and the protein is separated and tested.その results, ラット14-3-3ζとアミノ acid レベルで99.6% identity をもつマウスcDNA が単leave された. 14-3-3はRaf-1やBcr-AblなどのキナーにcombinationしてそのActivityをcontrolしているとのreportがある.このマウス14-3-3ζをMBPやGSTのfusion proteinとして large intestine Bacteria are out thereいて片べたところ、Non-oxidized weelおよびcdc2キナーゼによされたweelのいずれにも合することが明らかとなった. The cdc2 キナーゼにより琐燐されたweelはcdc2/cyclinB と binding しているが, この complex にも14-3-3ζは binding した.また、こり Combined はキナーゼドメインを有むC END realm においてみられ, control ドメインであるN end area には combined with しなかった. Now 14-3-3ζのwee1キナーゼActiveに対するeffectを検同中である. Chromosome decondensation control mechanism, temperature sensitivity, TM13 cell DNA, neo transfer, Alu alignmentーブにして 2 times duplicate strain のゲノムDNAライブラリーからおよそ20KbのゲノミックDNAがこのtsTM13 cells をphase complement する缝子として単利した.それをプローブにもちいてマウスcDNAライブラリーからcDNAを単利した.そのRESULTSこのcDNAは不だreportされていない缝子であった. Part of the story is about the high quality of the same character and the future problems of the future.