ニワトリ細胞株を利用したミトコンドリアリン脂質の細胞機能に関する遺伝生化学的研究

利用鸡细胞系对线粒体磷脂的细胞功能进行遗传和生化研究

基本信息

  • 批准号:
    13771404
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.47万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
  • 财政年份:
    2001
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2001 至 2002
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

ニワトリBリンパ球細胞株DT40は高頻度に相同組み替えを起こす、高等動物細胞では唯一の、細胞株である。この細胞株はゲノムと相同な配列を持つ外来DNAがランダムインテグレーションとほぼ同じ比率で相同組み替えによってゲノムに組み込まれる特徴を有する。このためにDT40には遺伝子ノックアウト株を容易に作製できる利点があり、実際に多数の遺伝子欠損株が樹立されている。さらにコンディショナル変異株の作成もできるので細胞レベルで致死となる遺伝子ノックアウトも可能である。従って、目的遺伝子のニワトリゲノムクローンが得られればこの細胞株から遺伝子欠損株の作製が可能である。そこで、DT40株を利用したカルジオリピン合成酵素遺伝子欠損株の作成を開始した。ニワトリゲノムからCL合成酵素遺伝子の候補遺伝子を単離し、ターゲッチングベクターを作成した。そして、DT40株にこのベクターを導入してゲノムに組み込まれた株を約60クローン分離してサザンブロット法により目的部位に組み込まれたか否かを解析したが、現在のところターゲッチングに成功した株はえられていない。もっと広い範囲のニワトリゲノムクローンがターゲッチングには必要である可能性がある。
ニ ワ ト リ B リ ン パ ball cell lines DT40 は high frequency に み same group for え を up こ で す, higher animal cells only の は, cell lines で あ る. こ の cell lines は ゲ ノ ム と な with same column を hold つ foreign DNA が ラ ン ダ ム イ ン テ グ レ ー シ ョ ン と ほ ぼ group with the same ratio じ で み for え に よ っ て ゲ ノ ム に group み 込 ま れ る, 徴 を have す る. こ の た め に DT40 に は posthumous son 伝 ノ ッ ク ア ウ ト strains を に easily for the で き る tartness が あ り traces of the event, be most に の 伝 son owe damage strain が set さ れ て い る. さ ら に コ ン デ ィ シ ョ ナ ル - different strains の made も で き る の で cells レ ベ ル で death と な る posthumous son 伝 ノ ッ ク ア ウ ト も may で あ る. 従 っ て, purpose but 伝 の ニ ワ ト リ ゲ ノ ム ク ロ ー ン が have ら れ れ ば こ の cell lines か ら heritage 伝 system が may owe loss strains の son で あ る. そ こ で, DT40 を utilize し た カ ル ジ オ リ ピ ン synthetic enzyme heritage 伝 son owe damage strain の made を began し た. ニ ワ ト リ ゲ ノ ム か ら CL synthetic enzyme heritage 伝 child の alternate but 伝 を 単 し, タ ー ゲ ッ チ ン グ ベ ク タ ー を made し た. そ し て, DT40 に こ の ベ ク タ ー を import し て ゲ ノ ム に group み 込 ま れ た strains of about 60 ク を ロ ー ン separation し て サ ザ ン ブ ロ ッ ト method に よ り purpose parts に group み 込 ま れ た か no か を parsing し た が, now の と こ ろ タ ー ゲ ッ チ ン グ に successful し た strains は え ら れ て い な い. も っ と hiroo い van 囲 の ニ ワ ト リ ゲ ノ ム ク ロ ー ン が タ ー ゲ ッ チ ン グ に は necessary で あ る possibility が あ る.

项目成果

期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
K.Kawasaki et al.: "Purification of phosphatidylglyceropnosphate synthase frpm Chinese hamster ovary cells"Biochemical Journal. 354. 9-15 (2001)
K.Kawasaki等人:“中国仓鼠卵巢细胞磷脂酰甘油合酶的纯化”生物化学杂志。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
K.Kawasaki, M.Nishijima: "Purification of Phosphatidylglycerophosphare Synthase from Cultured Mammalian Cells"Membrane protein protocols. (in press).
K.Kawasaki,M.Nishijima:“从培养的哺乳动物细胞中纯化磷脂酰甘油磷酸合酶”膜蛋白方案。
  • DOI:
  • 发表时间:
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    0
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  • 通讯作者:
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