权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

cPLA2及びそのアダプター分子のリン酸化・脱リン酸化による機能制御機構の解析

cPLA2及其衔接分子磷酸化和去磷酸化的功能控制机制分析

基本信息

批准号：
13780509
负责人：
中谷良人
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780509/
关键词：
cPLA2 ビメンチン CaMKII リン酸化 PGE2

项目摘要

プロスタグランジン(PG)産生は刺激の種類により二通りの応答性、すなわち細胞内カルシウム濃度を上昇させる刺激による一過的なPG産生である即時的応答(分単位)とサイトカインやLPS等の刺激による持続的なPG産生である遅発的応答(時間単位)があり、cPLA2は両応答に必須である。このcPLA2の活性調節機構をそのアダプター分子ビメンチンとの相互作用を中心に解明することを目指した。cPLA2とビメンチンはともに細胞内カルシウム濃度上昇に伴ってそれぞれ複数の部位がリン酸化されることが知られている。cPLA2はMAPキナーゼ(MAPK)とMAPKにより活性化されるキナーゼ群によりリン酸化され活性上昇することが報告されている。前年度までに、カルシウムにより制御を受けるCaMKIIに注目し、その特異的阻害剤であるKN-93をラット線維芽細胞株に前処理した結果、カルシウムイオノフォア刺激に伴うPGE2産生が顕著に抑制された。このときMAPキナーゼの活性化にKN-93は影響しなかったことから、MAPキナーゼを介さない経路でcPLA2が活性化される可能性が示唆された。一方、ビメンチンはcPLA2との結合部位であるヘッドドメインに多数のリン酸化サイトが存在し、PKA, PKC, CaMKII, Rhoキナーゼ等によりリン酸化されることが報告されている。そこで、本年度はCaMKIIによりリン酸化されることが予想される38番目と82番目のセリン残基に変異を導入したビメンチンcDNAを作製し、ビメンチン非発現細胞株に遺伝子導入しイオノフォア刺激に伴うアラキドン酸産生を検討した。その結果、それぞれのsingle mutantは対照細胞(天然型ビメンチン強制発現細胞)と同程度のPGE2産生を示したのに対し、両方の部位に同時に変異を導入した。double mutantをトランスフェクトした場合は、天然型を導入したものに比べてアラキドン酸産生が減少する傾向が観察された。従って、ビメンチンのCaMKIIリン酸化サイトの両方がリン酸化されることがアラキドン酸代謝の正常な進行に重要であることが示唆された。

The PG production is dependent on the type of stimulus, the response of the two-way channel, the increase of the intracellular concentration, the immediate response of the PG production, the response of the continuous PG production, and the response of the cPLA2 to the stimulus. The mechanism for regulating cPLA2 activity is described in detail below. cPLA2 is a protein that increases intracellular concentrations and increases the number of sites in the cell. cPLA2 MAPK activity increases when MAPK activity increases. In the past year, CaMKII has attracted attention and specific inhibitors such as KN-93 have been found to inhibit the production of PGE2. KN-93 has been shown to be able to activate cPLA-2 in the MAP pathway. One side, the other side, the other side. This year, CaMKII was introduced into a 38-site, 82-site, and 82-site variant of the CaMKII gene, and the cDNA was introduced into a non-discovery cell line. As a result, single mutants were introduced into the cells (naturally occurring stress cells) at the same level of PGE2 production and at the same time at different sites. Double mutant has a tendency to reduce acid production when introduced into the environment, compared to natural mutants. CaMKII is an important component of the acid metabolism.