カエル嗅細胞に存在する新規カルシウム結合蛋白質p2601fの機能解析

青蛙嗅细胞中新型钙结合蛋白 p2601f 的功能分析

• 批准号: 13780636
• 负责人: 三輪 尚史
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780636/
• 关键词: カルシウム; カルシウム結合蛋白質; 嗅細胞

匂いの感覚細胞である嗅細胞の順応には匂い刺激後に流入するカルシウムイオン(Ca)が必要であることが示されている。しかし、その分子機構の詳細はまだ明らかではない。最近、我々がカエル嗅上皮からクローニングした新規のCa結合蛋白質、p26olfは匂い受容の場である嗅繊毛に局在し、匂い受容体の脱感作に関与すると考えられているβ-アドレナリン受容体キナーゼとCa存在下で結合することが示唆されている。そこで、本研究では、p26olfの嗅細胞におけるCa依存的な順応調節の可能性を検討した。まず、これまでの結果から、p26olfが匂い受容過程のリン酸化反応に関与する可能性が考えられたので、嗅繊毛におけるリン酸化反応を解析した。単離した嗅繊毛を用いた実験から嗅繊毛内に主要なリン酸化蛋白質(〜45kDa)が認められた。この主要なリン酸化蛋白質のみかけのリン酸化量はG蛋白共役型受容体キナーゼによるリン酸化と、Ca依存性ホスファターゼによる脱リン酸化のバランスの上に成り立っていることがわかった。匂い刺激後の高Ca濃度状態ではみかけのリン酸化量は減少していたことから、このリン酸化蛋白質が繊毛内Ca情報伝達系に関与する可能性は高いと考えている。現時点では、この蛋白質のリン酸化へのp26olfの影響は確認できていない。p26olfのCa依存的な生理作用を考える上で、p26olfのCa結合能、Ca親和性を明らかにすることは重要である。そこで、p26olfのCa結合特性を平衡透析法により解析した。その結果、p26olfの4ケ所の推定Ca結合部位全てにCaが結合する一方で、その各Ca結合部位は異なったCa親和性をもち、ある特定の順序でCaが結合する可能性を示した。この結果からp26olfは実際に嗅繊毛内のCa濃度を検出し、嗅繊毛内Ca情報伝達系に関与する可能性が示された。

In the middle of the sensory cells, the olfactory cells flow into the sensory cells after stimulation. The details of molecular structure are as follows: Recently, we have investigated the association of Ca binding protein and p26olf with the receptor in the olfactory epithelium and the receptor desensitization in the presence of Ca. This study explored the possibility of Ca-dependent regulation of p26olf in olfactory cells. The results of this study show that p26olf is the most important factor in the analysis of acidification reaction in the process of absorption. The main acidic protein (~ 45kDa) in the olfactory hair is recognized by the enzyme. The amount of acid in the main protein is the amount of acid in the G protein co-active receptor. The amount of acid in the Ca-dependent protein is the amount of acid in the G protein co-active receptor. After stimulation, the amount of calcium in hair decreased, and the possibility of calcium in hair was high. At present, the effect of protein hydrolysis on p26olf is confirmed. The Ca binding energy and Ca affinity of p26 olf are important. Analysis of Ca binding properties of p26olf by equilibrium dialysis. The results show that all the estimated Ca binding sites of p26olf have different Ca affinities and the possibility of Ca binding in a specific order. The results show that the Ca concentration in olfactory hair can be detected by p26olf, and the relationship between Ca information in olfactory hair and its expression is possible.

项目成果

Miwa, N.: "Calcium-binding and identification of possible target protein(s) of p26olf, an S100-like calcium-binding protein in the frog olfactory epithelium"Jpn. J. Physiol.(Suppl). 51. S210 (2001)

Miwa, N.：“p26olf 的钙结合和可能靶蛋白的鉴定，p26olf 是青蛙嗅觉上皮细胞中的 S100 样钙结合蛋白”Jpn。

Miwa, N.: "Calcium-binding by p26olf, an S100-like protein in the frog olfactory epithelium"Eur. J. Biochem.. 268. 6029-6036 (2001)

Miwa, N.：“p26olf 与钙结合，p26olf 是青蛙嗅觉上皮细胞中的一种 S100 样蛋白”Eur。

Miwa, N.: "Frog p26olf, a molecule with two S100 domains in single peptide"Microsc. Res. Tech.. (in press).

Miwa, N.：“Frog p26olf，一种在单个肽中具有两个 S100 结构域的分子”Microsc。

Uebi, T.: "Detection of 35kDa proteins as possible target proteins of p26olf"Neurosci. Res. (Suppl). (in press).

Uebi, T.：“检测 35kDa 蛋白作为 p26olf 的可能靶蛋白”Neurosci。