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ミジンコの形質転換系の開発と形態形成遺伝子群の機能解析

水蚤转化系统的开发及形态发生基因的功能分析

基本信息

批准号：
13760237
负责人：
志賀靖弘
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13760237/
关键词：
ミジンコ形質転換系発生生殖系列形態形成遺伝子 Daphnia 形質転換 Vasa 形態形成

项目摘要

1)形質転換ベクターの構築ミジンコのアクチン及びvasa遺伝子を染色体DNAライブラリーから単離し、各クローンの全塩基配列た。プロモーターを含むと考えられるそれらの遺伝子上流域の下流に、ミジンコのヘモグロビン遺伝子、クラゲのGreen Fluoprescent Protein(GFP)大腸菌のLacZ遺伝子等の選択マーカー遺伝子を連結した形質転換ベクターのシリーズを、比較的広範囲の宿主で機能することが知られているpiggyBacベクターを元に遺伝子工学的に構築した。2)ミジンコの形質転換形確立の試みマイクロインジェクション法を用いて、ミジンコ卵内への形質転換ベクター導入を試みた。ミジンコ卵にDNA注入用の針を挿入すると同時に内圧により卵が破裂してしまうことから、親個体の背部からのインジェクションを試みた。形質転換ベクターの溶液や、形質転換ベクター溶液を含んだリポソームなどを様々な条件でインジェクションしてみたが、形質転換体は得られなかった。ミジンコ体液中においてDNAが分解されてしまう、体液で希釈されてしまうために生殖系列まで形質転換ベクターが到達しないなどの原因が考えられる。そこで現在は、生殖系列以外の細胞で合成され、その後生殖系列に特異的に蓄積する事が明らかになっているビテロゲニン(既にクローン化済み)タンパクの一部をリポソーム作製時に用いることによって、生殖系列の付近に形質転換ベクターを含んだリポソームを局在させられないか?というアイデアを検討しているところである。

1)The structure of the chromosome DNA sequence of the chromosome DNA sequence The selection of the downstream, downstream, 2) To establish the morphological transformation of the egg and to introduce the morphological transformation of the egg into the egg. A needle for injecting DNA into the egg is inserted into the egg and the egg is ruptured. The solution of the physical and chemical transformation is composed of the following components: The reason why DNA in body fluid is decomposed and body fluid is expected to be reproduced is examined. In addition, the cells outside the reproductive series are synthesized, and the specific accumulation in the reproductive series is not limited to the specific accumulation in the reproductive series.というアイデアを検讨しているところである。