ミトコンドリア異常症の新しい遺伝子異常発見のスクリーニングシステムの構築

构建发现线粒体疾病新遗传异常的筛查系统

• 批准号: 13770418
• 负责人: 秋田 幸大
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770418/
• 关键词: ミトコンドリア病; 点変異; スクリーニング; 血管内皮障害; L-アルギニン; プロセッシング

[研究の背景]神経筋疾患領域での難病ミトコンドリア病は、ミトコンドリアの機能障害を特徴とし、ミトコンドリアDNA(mtDNA)の異常に起因する遺伝病である。本遺伝子異常は、現在では人の遺伝子病としては最も頻度の高い疾患と考えられており、様々な病型がmtDNAの変異と関連付けられて報告されている。[目的]未知の遺伝子異常を発見するための系統的スクリーニングシステムを開発し、遺伝子異常と病型との解明を行う。[結果および考察]今回、mtDNA(tRNA)の点変異の分離・同定を行った。インフォームドコンセントのもとで、患者より末梢血白血球もしくは主要症状を呈している臓器からDNAを分離した。ミトコンドリアtRNAの全てを網羅する13個のPCR-Fragmentを増幅しSSCPにて泳動後、銀染色を行い変異部位を検出・同定を行った。塩基配列は、Cy5で標識したprimerを用い、Phamacia DNA sequencerにてdirect sequenceを行った。各々の点変異に合せてprimerのを作成し、制限酵素によるPCR/RFLP解析を行い、点変異含量を決定した。また、ミトコンドリアDNA(tRNA)の点変異を認めるミトコンドリア脳卒中の原因にミトコンドリアの血管障害が関与することを見出し、L-アルギニンを使用した新しい治療法を開発報告した(Neurology 2002 12;58(5):827-8)。tRNALeu(UUR)の点変異は、ミトコンドリアRNAプロセッシング障害を来すと考えられた(Neuromuscular Disorders 2003 13(3):259-62)。今後も、系統的スクリーニングシステムを用いmtDNA解析を行うことで、各種遺伝子における発症機構に関する分子生物学的研究を行う。

[Background] Pathological characteristics and causes of abnormal DNA(mtDNA) in neuromuscular disorders. The most frequent of these diseases is the abnormal mtDNA, and the most frequent of these diseases is the abnormal mtDNA, and the most frequent mtDNA is the abnormal mtDNA. [Objective] To explore the development of genetic anomaly and disease type in the system. [Results] This time, mtDNA(tRNA) point of divergence and separation, the same as the line. The patient's peripheral white blood cells are isolated from the main symptoms. The total number of PCR-Fragments in the DNA sequence was 13. After SSCP staining, the different sites in the DNA sequence were identified. Cy5 primer, Phamacia DNA sequencer, direct sequence The PCR/RFLP analysis of each point difference was performed to determine the content of the primer. The discovery and use of novel therapeutic methods for the identification of tRNA gene mutations and their association with vascular disorders in stroke (Neurology 2002 12;58(5):827-8). tRNALeu(UUR) is a novel gene that can be used to control the development of viral RNA (Neuromuscular Disorders 2003 13(3):259-62). In the future, research on molecular biology will be carried out in the field of molecular biology.

项目成果

Koga Y, Akita Y et al.: "Effects of L-arginine on the acute phase of strokes in three patients with MELAS"Neurology. 58. 827-828 (2002)

Koga Y、Akita Y 等人：“L-精氨酸对三名 MELAS 患者中风急性期的影响”神经病学。

Koga Y, Akita Y et al.: "Increased mitochondrial processing intermediates associated with three tRNA(Leu(UUR)) gene mutations"Neuromuscular Disorders. 13. 259-262 (2003)

Koga Y、Akita Y 等人：“与三个 tRNA (Leu(UUR)) 基因突变相关的线粒体加工中间体增加”神经肌肉疾病。