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転写因子ATF-2に関わる転写制御機構の構造生物学

转录因子ATF-2相关转录调控机制的结构生物学

基本信息

批准号：
14780477
负责人：
長土居有隆
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14780477/
关键词：
転写調節因子 NMR 構造生物学

项目摘要

平成15年度1.転写超子ATF-2の転写活生化ドメインDNA結合ドメインとの複合体の立体構造と構造変化ATF-2は転写の不活性化状態では、分子内相互作用(ドメイン-ドメイン間)によりそれぞれのドメインが持つ機能をマスクしている。この複合体の構造を決定するために、それぞれの大腸菌大量発現系による目的蛋白質を発現させ、精製を行った。その立体構造解析には500Mhz,600Mhzを使用した。NMRでは分子量増大に伴うNMRシグナルの複雑さとDNA結合ドメイン側の溶解度の低さからシグナルの解析は不可能であった。次に転写活性化ドメインとDNA結合ドメインとの共発現系を作製して複合体形成を大腸菌内で試みた。その結果、構造安定化に伴うNMRシグナルは得られなかった。2.ATF-2のDNA結合ドメインをとE1A-CR3領域との相互作用アデノウイルスの初期遺伝子産物であるE1AはCR3領域を介してATF-2のDNA結合ドメインと直接相互作用する。この相互作用をNMR法によって解析するためにCR3、CR23、CR123の相互作用部位を含む3つの領域の発現系を構築した。さらに溶解度の低いそれぞれの領域とATF-2のDNA結合ドメインとの共発現系の作製も行った。不溶性としか得られないE1A由来の蛋白質の発現は、共発現系においても改善されずATF-2と共に不溶性画分に移行してしまった。3.転写因子ATF-2の転写活性化ドメインとp38との複合体解析ATF-2をリン酸化することが知られるp38キナーゼとの複合体解析を行うために、p38キナーゼの大腸菌大量発現系を作製して、現在目的蛋白質の単離・精製を行っている。

1. The three-dimensional structure and structural transformation of the complex of hyperonic ATF-2 in the inactive state, intramolecular interaction (DNA-DNA The structure of the complex is determined by the production and purification of target proteins in Escherichia coli production systems. The three-dimensional structure analysis is 500MHz,600MHz. NMR increases molecular weight accompanied by low solubility of NMR molecules on the DNA binding side and impossibility of resolution. The second is to control the co-expression of active DNA and DNA binding proteins, and to test the formation of complexes in E. coli. The results of structural stabilization and NMR analysis are presented. 2. ATF-2 DNA-binding domain interaction with E1A-CR3 domain and direct interaction with ATF-2 DNA-binding domain interaction with E1A-CR3 domain. The interaction between CR3, CR23 and CR123 was analyzed by NMR method, and the interaction site and the discovery system of CR3, CR23 and CR123 were constructed. The low solubility of ATF-2 in the DNA binding region and the co-production of ATF-2 in the DNA binding region Insoluble E1A-derived protein development and co-development system is improved by ATF-2 and co-insoluble protein migration. 3. Analysis of complex of ATF-2 and p38 gene activation, purification and purification of target protein.